[发明专利]一种石竹属花卉中花色苷的高效液相色谱检测方法

说明书

本发明属于花卉成分分析检测技术领域。具体涉及一种石竹属花卉中花色苷的高效液相色谱检测方法。对石竹属花卉的花色苷物质成分进的分离鉴定，鉴定方法为，利用甲醇‑盐酸浸提液提取石竹属花卉中花色苷物质，以合并多次离心的上清液代替过有机滤膜，有效避免了检测中受滤膜杂质污染的问题。利用高效液相色谱串联质谱(HPLC‑MS)联用检测分析石竹属花卉花色苷物质；利用标准品及mzCloud数据库结合对所得花色苷进行定性分析；绘制标准曲线对花色苷物质成分进行定量分析。本发明操作简便、快速，定性与定量分析准确，适用于石竹属花卉中花色苷的测试分析。

技术领域

本发明属于园艺植物花色素的提取与检测技术领域，主要涉及一种石竹属花卉中花色苷的高效液相色谱检测方法。本发明涵盖石竹属花卉花色素的定性定量分析体系的建立，与分析化学和检测技术领域相关。

背景技术

石竹属下有约600种花卉，如中国石竹、瞿麦、香石竹(康乃馨)、须苞石竹等都是石竹属下被广泛种植观赏的花卉品种。石竹属花卉不仅花色多样，且多数具有多种规则或不规则形色斑，花色组分中含有黄酮类和花青素类等物质，所含有的天然花色苷能够起到促进人类身体健康、预防心血管疾病的作用，具有较高的药用价值。

目前国内乃至世界范围内对于整个石竹属花卉花色苷物质的分析方法尚未存有完整的体系，国外同样鲜有相关报道研究，故建立起完整的石竹属花卉的花色苷物质分析体系具有重大理论和实践意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种对石竹属花卉花色苷物质进行分离和鉴定方法，以解决石竹属花卉花色苷物质成分分析的问题，填补石竹属花卉花色苷物质分离鉴定方法的空白。

本发明的技术方案如下所述：

本发明的方法包括一个利用甲醇水溶液-盐酸作为浸提液的提取石竹属花卉中花色苷物质的步骤；一个利用适用于高效液相色谱质谱联用技术检测分析上述所得石竹属花卉中花色苷物质，并对其中香气成分进行定性定量分析的步骤。

本发明提供了一种对石竹属花卉中的花色苷物质成分进行分离鉴定的方法，所述方法的步骤为：

(1)利用甲醇水溶液-盐酸作为浸提液提取石竹属花卉中花色苷物质：准确称取0.5-1g石竹属花卉的花瓣样品，在液氮中研磨至粉末状，加入500μL配制的浸提液，上述甲醇-盐酸浸提液配方为，含0.1％盐酸的50％甲醇水溶液(即甲醇水溶液-盐酸浸提液，简称：甲醇-盐酸浸提液)，于涡旋仪上振荡混匀10min，再置于冰浴超声波清洗仪中处理20min；作为优选方案，是在12000rmp下离心5min，吸取上清液，重复上述离心操作三次，合并上清液(含石竹属花卉中花色苷物质)，将上清液保存于进样瓶中以便用于高效液相色谱质谱联用(HPLC-MS)分析；

(2)高效液相色谱质谱联用技术检测分析：将步骤(1)所得的石竹属花卉花色苷物质进行定性和定量分析：

1)液相色谱条件：使用ACQUITY BEH C18柱，该色谱柱规格为2.1mm*100mm，1.7μm；流动相采用含0.1％甲酸的超纯水为A相，含0.1％甲酸的乙腈为B相；柱温设定为40℃，流速设定为0.35ml/min，进样量设定为2μL；洗脱梯度为：当仪器从开始运行检测的0.00min时，设定B相体积百分比为5％；当仪器运行检测至5.00min时，将B相体积百分比增至20％；当仪器运行检测至15.00min时，将B相体积百分比增至40％；当仪器运行检测至25min时，将B相体积百分比增至100％(仪器分析时间是指当仪器开始运行检测到第n分钟时，B相的体积百分比会随之变化。例如当仪器运行0min时，B相的体积百分比为5％；当仪器运行至5min时，B相的体积百分比为20％；当仪器运行时间达到15min时，B相体积百分比增至40％；当仪器运行检测至25min时将B相体积百分比增至100％)，并保持1min，当仪器运行检测至26min时，将B相体积百分比降至5％，并平衡至4min；