[发明专利]一种特立帕肽hPTH(1-34)的生产和纯化方法

权利要求书

1.一种人特立帕肽hPTH(1-34)的生产与纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将聚集肽的基因序列、切割标签的基因序列及人特立帕肽hPTH(1-34)的基因序列依次连接，形成融合蛋白的基因，将所述融合蛋白的基因导入宿主细胞，得到工程菌；

(2)培养步骤(1)所述工程菌表达所述融合蛋白，然后裂解工程菌，离心取沉淀，得到融合蛋白的聚集体；

(3)将步骤(2)所述融合蛋白的聚集体进行切割，得到所述人特立帕肽hPTH(1-34)。

2.根据权利要求1所述的人特立帕肽hPTH(1-34)的高效表达与纯化方法，其特征在于，步骤(1)所述聚集肽包含一个以上的两亲性自组装短肽。

3.根据权利要求2所述的人特立帕肽hPTH(1-34)的高效表达与纯化方法，其特征在于，所述两亲性自组装短肽为类表面活性剂短肽、两亲性α螺旋短肽中的一种以上；所述类表面活性剂短肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述两亲性α螺旋短肽的氨基酸序列如SEQID NO:3所示。

4.根据权利要求1所述的人特立帕肽hPTH(1-34)的高效表达与纯化方法，其特征在于，步骤(1)所述切割标签为化学切割位点、酶法切割位点或自切割位点。

5.根据权利要求4所述的人特立帕肽hPTH(1-34)的高效表达与纯化方法，其特征在于，所述切割标签为自切割位点，所述自切割位点为内含肽。

6.根据权利要求5所述的人特立帕肽hPTH(1-34)的高效表达与纯化方法，其特征在于，所述内含肽为MtuΔI-CM，所述MtuΔI-CM的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

7.根据权利要求5所述的人特立帕肽hPTH(1-34)的高效表达与纯化方法，其特征在于，所述内含肽为MtuΔI-CM的突变体，所述MtuΔI-CM的突变体为MtuΔI-CM的m1、m2或m3突变体，所述MtuΔI-CM的m1突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述MtuΔI-CM的m2突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，所述MtuΔI-CM的m3突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO:11所示。

8.根据权利要求5所述的人特立帕肽hPTH(1-34)的高效表达与纯化方法，其特征在于，当所述自切割位点为内含肽时，步骤(3)中所述切割，包括：将所述融合蛋白的聚集体分散在缓冲液中，进行切割处理，离心取上清液，得到含人特立帕肽hPTH(1-34)的溶液；所述缓冲液的pH值为5.5～6.8，所述切割处理的温度为4～37℃，切割处理的时间为3～48h。

9.根据权利要求1所述的人特立帕肽hPTH(1-34)的高效表达与纯化方法，其特征在于，所述人特立帕肽hPTH(1-34)的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。

10.根据权利要求1-9任一项所述的人特立帕肽hPTH(1-34)的高效表达与纯化方法，其特征在于，所述聚集肽的基因序列与切割标签的基因序列之间通过接头连接，所述接头为PT型接头；所述PT型接头的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示。