[发明专利]大豆基因启动子pRPS28和pRPS28-I在大豆、拟南芥及烟草中的应用有效

申请号：	202110748338.5	申请日：	2021-07-02
公开（公告）号：	CN113462690B	公开（公告）日：	2022-06-21
发明（设计）人：	王学路;王海娇;彭亚齐	申请（专利权）人：	河南大学
主分类号：	C12N15/113	分类号：	C12N15/113;C12N15/11;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/54;A01H6/20;A01H6/82
代理公司：	郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104	代理人：	张丽
地址：	475001***	国省代码：	河南;41
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摘要：
搜索关键词：	大豆基因启动子 prps28 拟南芥烟草中的应用
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【权利要求书】：

1.大豆基因启动子在外源基因表达中的应用，其特征在于，所述启动子为全长型启动子pRPS28或内含子存在型启动子pRPS28-I，所述启动子作为泛表达启动子，用于驱动外源基因表达；启动子pRPS28的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，启动子pRPS28-I的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述外源基因为GUS基因。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述启动子用于大豆时，能够驱动外源基因在大豆子叶、胚根、胚芽、真叶、复叶、芽、叶柄、节间、根和根瘤中表达。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述启动子用于拟南芥时，能够驱动外源基因在拟南芥全株、花、荚果中表达。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述启动子用于烟草时，能够驱动外源基因在烟草叶片中表达。

6.含有大豆基因启动子的重组载体，其特征在于，所述重组载体是将大豆基因启动子pRPS28或pRPS28-I重组进入载体pCAMBIA1391Z-BAR中构建获得，具体步骤如下：以pRPS28或pRPS28-I的PCR扩增片段为模板，并将PCR扩增片段通过无缝克隆法克隆进大豆稳定转化载体pCAMBIA1391Z-BAR中，获得大豆稳定转化载体pRPS28-GUS-BAR、pRPS28-I-GUS-BAR；

所述载体pCAMBIA1391Z-BAR，是将载体pCAMBIA1391Z首先采用限制性内切酶XhoI将载体线性化，然后再通过无缝克隆的方法将载体中的筛选标记HygR基因替换为BAR基因得到的；

构建pRPS28-GUS-BAR表达载体所用引物为：

pRPS28-GUS-BAR-F：

GACCATGATTACGCCAAGCTT CACCACCCAATCCATAACCACCAC

pRPS28-GUS-BAR-R：

CCAGTGAATTCCCGGGGATCC CTGATGCAAAACACGAACAAAGAAAG，

构建pRPS28-I-GUS-BAR表达载体所用引物为：

pRPS28-I-GUS-BAR-F：

GACCATGATTACGCCAAGCTT CACCACCCAATCCATAACCACCAC

pRPS28-I-GUS-BAR-R：

CCAGTGAATTCCCGGGGATCC CCTGCTCAAACACAATCAACAG，

启动子pRPS28的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，启动子pRPS28-I的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。