[发明专利]一种猪源胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种猪源胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体的重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；所述单克隆抗体的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明所得猪源胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体能够用于胞内劳森菌，以制备的单克隆抗体为一抗，IFTC‑标记的羊抗鼠抗体为二抗，检测感染细胞中的胞内劳森菌，为肠上皮细胞中胞内劳森菌抗原检测方法的建立奠定基础。

技术领域

本发明属于单克隆抗体技术领域，具体涉及一种猪源胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体及其应用。

背景技术

猪增生性肠炎(Porcine proliferative enteropathy,PPE)，是由胞内劳森菌(LawsoniaIntracellularis，LI)感染引起的，在世界各地猪场中普遍存在的一种肠道疾病，主要影响猪群生长速度，降低日增重等，已成为现代养猪业中一种重要的肠道疾病。PPE在欧洲和美国等地发病率可达50％-70％，在韩国、泰国、马来西亚等地的猪场由于抗生素的限制使用，使得这些地区PPE阳性率达100％，仅美国养猪业一年因PPE造成的损失就不低于2000万美元，英国一年因PPE损失约400万英镑。在欧洲，由于抗生素和添加剂明令禁止使用，使得当地回肠炎的危害性已大大超过了呼吸道疾病。从2005年来，PPE已成为中国华南、华东地区规模化养猪场的一种常见病，检测结果表明，3-4周龄和8-10周龄猪群PPE阳性率一般低于50％，而从18-24周龄PPE阳性率高达50％-70％，后备母猪和经产母猪阳性率分别为60％-80％。中国传统的防控PPE的方法多采用在饲料饮水中添加泰妙菌素、泰乐菌素等抗生素，但此方法易通过生物富集作用，将抗生素散播在自然界和人体内，从而造成生物安全隐患，此外，由于抗生素的频繁使用，细菌产生耐药性，这将对PPE的防控构成严重威胁。

胞内劳森菌为严格的胞内寄生菌，只能在特定的细胞中进行生长，如McCoy、IEC-18、Hep-2、IPEC-J2、PK-15等细胞系。此外，该菌生长环境极其苛刻，需要在微需氧环境(83.2％N₂，8.8％CO₂和8.0％O₂)中生长。因此，胞内劳森菌的分离、培养极其困难，全球只有少数实验室具备成功分离、培养LI的能力，其原因主要是因为猪肠道中微生物菌群复杂，在分离过程中极易受其他肠道微生物的污染；其次，缺乏准确的检测感染细胞中胞内劳森菌的检测方法，故国内很少有实验室具备成功从临床样品中分离、培养胞内劳森菌的能力，其严重阻碍了国人对该病原菌的进一步研究。

疾病的诊断对其防控方案的制定具有重要意义。对于PPE的诊断，国际普遍使用的诊断方法主要分为特异性诊断和非特异性诊断两大类。其中，以组织病理学诊断为主的非特异性诊断方法有Warthin-Staixy银染技术、苏木素－伊红染色(HE)、Ziehl-Neelsen法等；特异性的诊断方法包括血清学、分子生物学和组织学的诊断，包括间接免疫荧光光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化(IHC)、原位杂交(ISH)等技术。目前，国内主要是提高PCR、qPCR和RPA-FLD等分子生物学方法间接地检测样品中LI的核酸，缺乏检测感染细胞中胞内劳森菌的免疫学方法，而单克隆抗体在病原诊断方法的建立中起至关重要的作用。关于胞内劳森菌蛋白的研究近年来不断完善，已报道的可作为候选抗原的蛋白，如LsaA、LatA、鞭毛相关蛋白0710、L10902、L11022和L11024等都被证实具有良好的免疫原性。Omp2为胞内劳森菌的外膜蛋白，迄今为止，国内外尚无制备胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体的相关报道。

发明内容

发明目的：针对上述技术问题，本发明提供了一种猪源胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体及其应用，制备的抗胞内劳森菌Omp2蛋白的单克隆抗体，为胞内劳森菌检测方法建立奠定基础。

技术方案：为了达到上述发明目的，本发明所采用的技术方案如下：