[发明专利]一种快速筛选漆酶产生菌的液体显色方法

权利要求书

1.一种快速筛选漆酶产生菌的液体显色方法，其特征在于,包括如下步骤：

S1：菌体选择培养：在培养皿中配置培养基，并在培养基上进行菌种接种培养，得到菌体，所述菌种为细菌或/和真菌；

S2：缓冲液配置：分别配置pH为4.5、5.0的0.05mol/L醋酸缓冲液和pH为7.0、8.0、9.0的0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液；

S3：显色反应底物溶液配置：根据步骤S2配置的缓冲液分别进行ABTS底物溶液、愈创木酚底物溶液、丁香醛连氮底物溶液、邻联甲苯胺底物溶液和邻苯二酚底物溶液配置，具体步骤如下：

ABTS底物溶液：按比例分别称取ABTS和pH为4.5的醋酸缓冲液，以1ml pH为4.5的醋酸缓冲液对应1mg ABTS进行混合，摇匀静置，制得ABTS底物溶液；

愈创木酚底物溶液：按比例分别称取愈创木酚和pH为5.0的醋酸缓冲液，以1mlpH为5.0的醋酸缓冲液对应1mg愈创木酚进行混合，摇匀静置，制得愈创木酚底物溶液；

丁香醛连氮底物溶液：按比例分别称取丁香醛连氮和pH为7.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，以1ml pH为7.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应0.4mg丁香醛连氮进行混合，摇匀静置，制得丁香醛连氮底物溶液；

邻联甲苯胺底物溶液：按比例分别称取邻联甲苯胺和pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，以1ml pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应1mg邻联甲苯胺进行混合，摇匀静置，制得邻联甲苯胺底物溶液；

邻苯二酚底物溶液：按比例分别称取邻苯二酚和pH为9.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，以1ml pH为9.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应1mg邻苯二酚进行混合，摇匀静置，制得邻苯二酚底物溶液；

S4：菌种显色能力测定：分别吸取步骤S3中制得的ABTS底物溶液、愈创木酚底物溶液、丁香醛连氮底物溶液、邻联甲苯胺底物溶液和邻苯二酚底物溶液放入试管中，并在试管中加入步骤S1中培养的菌体，25℃下静置反应，记录反应液显色时间；

S5：漆酶溶液制备：按质量比为6:4:3的比例称取麦麸、纤维质粉和甘蔗渣粉，并将称取的麦麸、纤维质粉和甘蔗渣粉置于三角瓶中，在瓶中加入含0.2％硫酸铵、1.5％玉米浆和0.005％硫酸铜的混合溶液，调pH至6.5，在121℃下灭菌30min，接种步骤S1中培养的菌体，以280r/min在摇床上振荡培养，当菌种为细菌时，需在35℃的条件下培养48h；当菌种为真菌时，需在30℃的条件下培养96h，培养滤液即为漆酶溶液；

S6：菌种产漆酶能力测定：将步骤S4中加入菌体的底物溶液和稀释的漆酶溶液在25℃的条件下保温5min，用1cm光径比色杯于420nm波长测光吸收，每小时光吸收增加1.0所需酶量定义为1个酶活力单位。