[发明专利]一组生姜内参基因及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，公开了一组生姜内参基因，所述内参基因为RBP基因、ATPase基因和40S_S3基因；还公开了应用。本发明的内参基因的稳定性好，为生姜功能基因的研究提供了更多的可能性。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一组生姜内参基因及其应用。

背景技术

生姜(Zingiber officinale Roscoe)是单子叶植物纲(Monocotyledoneae)姜目(Zingiberales)姜科(Zingiberaceae)姜属(Renealmias)的多年生草木植物。在我国栽培历史悠久，分布广泛，除东北、西北等高寒地区没有种植外，其他省市均有栽植，栽培相对简单方便。生姜既有抗肿瘤，抗氧化，抗炎抑菌，促进消化，改善血液循环等药用价值，也有作为调味品或食用菜等食用价值。随着市场经济和对外贸易的发展，生姜不仅在国内的销售量大，同时也经常加工成脱水姜、鲜姜块等出口其他国家，市场前景非常广阔。

基因表达分析是植物生理学研究中的一种重要方法，能提高对分子基础研究的认识。但是由于样品之间mRNA的提取差异以及反转录和PCR本身的性能差异，许多qPCR实验难以重复，使用内参基因是避免这些因素影响的有效途径之一，理想的内参基因应该在各种实验条件下都保持稳定。实时荧光定量PCR技术是目前分析基因表达的重要方法，而稳定的内参基因是准确定量基因表达水平的先决条件。

目前为止，尚未见生姜内参基因相关研究的报道，这严重制约了生姜分子育种研究进程。因此，在生姜中挖掘高度可信的内参基因十分必要。

发明内容

基于以上问题，本发明提供一组生姜内参基因及其应用，本发明的内参基因的稳定性好，为生姜功能基因的研究提供了更多的可能性。

为解决以上技术问题，本发明提供了一组生姜内参基因，所述内参基因为RBP基因、ATPase基因和40S_S3基因，所述RBP基因的核苷酸序列见SEQ ID NO.1，所述ATPase基因的核苷酸序列见SEQ ID NO.2，所述40S_S3基因的核苷酸序列见SEQ ID NO.3。

进一步的，所述RBP基因的实时荧光定量PCR引物序列见SEQ ID NO.4和SEQ IDNO.5，所述ATPase基因的实时荧光定量PCR引物序列见SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7，所述40S_S3基因的实时荧光定量PCR引物序列见SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9。

为解决以上技术问题，本发明还提供了一组生姜内参基因在制备研究生姜功能基因的试剂盒中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过对32个候选内参基因进行了delta-CT、geNorm、NormFinder、BestKeeper软件分析稳定性，并进行赋分排名，再用RefFinder做综合分析排名，成功筛选出适用的稳定内参基因；本发明针对科研和产业中生姜缺乏可靠的内参基因和分子育种需求，首次提出将RBP、ATPase、40S_S3基因作为生姜内参基因用于生姜的基因表达研究，解决了生姜没有内参基因的现状；本发明提出的检测引物组具有特异性，优化了PCR扩增程序，大大提高了检测效率、缩短了检测时间，提高了检测结果的可信度以及生姜基因表达分析研究的稳定性、可靠性和重复性。

附图说明

图1为本发明的实施例的内参基因的Cq值分析结果图；

图2为本发明的实施例的内参基因的综合稳定性分析结果图；

图3为本发明的实施例的内参基因的相关性分析与扩增效率结果图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。

实施例：