[发明专利]抗猪δ冠状病毒N蛋白的单克隆抗体和猪δ冠状病毒胶体金快速检测试纸条

说明书

本发明提供了一种抗猪δ冠状病毒N蛋白的单克隆抗体和猪δ冠状病毒胶体金快速检测试纸条，所述单克隆抗体包括：E8，重链和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1和NO：2所示；A10，重链和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：3和NO：4所示。所述胶体金快速检测试纸条包括：底板，粘合在所述底板上且依次搭接的样品吸收垫、结合垫、层析基质和吸水垫；所述结合垫上涂有所述E8包被的胶体金复合物；所述层析基质上靠近所述结合垫的一侧设有质控线，所述层析基质上靠近所述吸水垫的一侧设有检测线；所述质控线上涂有包被有抗鼠IgG二抗；所述检测线上包被有所述A10。特异性良好，灵敏度高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种抗猪δ冠状病毒N蛋白的单克隆抗体和猪δ冠状病 毒胶体金快速检测试纸条。

背景技术

腹泻性疾病严重限制养猪业的发展，复杂多样的病原感染是导致猪腹泻的重要病因之 一。由猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus，PDCoV)引起的新发病毒性腹泻成为当前猪 病防控的又一难题。

基于临床需求，目前已经建立了多种PDCoV检测方法，然而每一种方法各有优缺点， 单一的技术不能解决临床样本检测中的所有问题。病毒分离技术耗时费力，不便于快速检 测，仅适合实验室病原学的研究；PCR技术设备依赖性强，需要专业人员操作，同时操作 过程中易交叉污染，存在假阳性或假阴性的结果；等温扩增技术的引物设计复杂，样本容 易交叉污染且结果判断不够客观；基因芯片技术的成本高且耗时相对较长，对于临床样本 的检测实用性不强。一些免疫学的手段虽能检测病毒的抗体或者抗原，但不适合早期诊断， 且多数限于实验室操作。目前对于PDCoV的检测多采用PCR和RT-qPCR技术，无法实现即时性检测。针对猪腹泻病的流行现状和防治要求，对于猪δ冠状病毒的诊断，不但要求高的特异性和敏感性，还需要快速、简便、易于基层规模化养殖场和基层单位使用。

因此，如何开发一种检测该疫病的胶体金快速检测试纸条，对于养殖户预防有猪δ冠状 病毒引起的疫病具有重要意义。

发明内容

为了解决所述技术问题，本发明提供了一种抗猪δ冠状病毒N蛋白的单克隆抗体和猪 δ冠状病毒胶体金快速检测试纸条，可以特异性识别猪δ冠状病毒N蛋白，抗体特异性良好，灵敏度高。

在本发明的第一方面，提供了一种抗猪δ冠状病毒N蛋白的单克隆抗体，包括：

抗猪δ冠状病毒N蛋白的单克隆抗体E8，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；

抗猪δ冠状病毒N蛋白的单克隆抗体A10，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

进一步地，所述单克隆抗体还包括：

所述单克隆抗体的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸得到的具有相 同功能的抗体；

或者包括具有与所述重链可变区具有至少80％的同源性的氨基酸序列的重链可变区； 和与所述轻链可变区具有至少80％的同源性的氨基酸序列的轻链可变区；

或者所述单克隆抗体的N端和/或C端连接标签得到的抗体；

所述单克隆抗体包括：人抗体、人源化或嵌合抗体。

在另外一些实施方案中，VH和/或VL氨基酸序列可以与上述序列85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源。具有与上述序列的VH和VL区高度(即80％或更高)同源的 VH和VL区的抗体可以如下获得：诱变(例如定点诱变或PCR介导的诱变)编码SEQIDNO： 1-6的核酸分子，然后用此处所述的功能试验检测编码的被改变抗体的保留的功能。