[发明专利]抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体、分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体、分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。本发明所述的一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC No.22321的杂交瘤细胞株分泌产生。实验证明，所述的单克隆抗体对猪Gasdermin D蛋白具有反应特异性，所述的单克隆抗体不仅能够检测猪GSDMD全蛋白，还能够检测活化切割后的猪GSDMD蛋白羧基端节段。本发明的提出对猪GSDMD生物学功能的研究具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体、分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，具体涉及一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体、产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本发明还涉及上述单克隆抗体用于检测猪的组织和细胞培养物中猪Gasdermin D蛋白表达和切割情况检测的方法。本发明属于生物技术领域。

背景技术

细胞焦亡(pyroptosis)是一种重要的程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)形式。与细胞凋亡不同，细胞焦亡是一种具有促炎特性的PCD形式。早期的研究发现，细胞焦亡发生的过程中，细胞中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、人的caspase-4/5和小鼠的caspase-11被活化。同时，细胞焦亡发生的过程中会增加IL-1β和IL-18等主要促炎性细胞因子以及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)等炎性介质的释放。Gasdermin D(GSDMD)是介导细胞焦亡的效应分子之一。全长GSDMD蛋白具有氨基酸结构域(GSDMD-N)和羧基端结构域(GSDMD-C)两个结构域，两个结构域之间通过柔性结构相连，柔性结构中有高度保守的caspases的酶切位点。完整的GSDMD分子，GSDMD-N和GSDMD-C相互结合，呈现自抑制状态。当细胞中的caspase-1、caspase-4/5以及caspase-11被激活时，可以在GSDMD-N和GSDMD-C之间对GSDMD进行切割。产生分子量30kDa左右的GSDMD-N和20kDa左右的GSDMD-C。GSDMD-N可以在细胞膜和线粒体膜上形成穿膜孔道。GSDMD-N在细胞膜上形成的穿膜孔道是IL-1β和IL-18以及IL-33等细胞因子向细胞外释放的主要途径。当GSDMD-N形成的穿膜孔道对细胞膜破坏严重时，细胞发生焦亡性裂解，大量内容物释放，加剧炎症反应。GSDMD除了可以被caspase-1、caspase-4/5和caspase-11切割为GSDMD-N和GSDMD-C两段外，还可以被caspase-3切割，切割产物为一个10kDa左右的肽段和一个43kDa左右的肽段。GSDMD被caspase-3切割产生的两段多肽均不表现生物学功能。GSDMD被caspase-3的切割被认为是细胞调控自身发生程序性死亡方式的重要机制之一。GSDMD的活化已被证实与多种疾病(如肿瘤、自身免疫性疾病以及传染性疾病等)的发生有密切关联，并且被认为是一个新的疾病治疗靶点。

目前，市售的GSDMD抗体均是针对人和小鼠GSDMD特异性的抗体，而缺少针对其他生物GSDMD具有特异性的抗体，这对于在其他生物中探讨GSDMD功能的工作来说是不利的。特异性抗体是研究蛋白质功能的重要工具之一，本发明旨在提供一种小鼠抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体，以及运用该单克隆抗体对猪源细胞和猪组织中GSDMD表达和切割情况进行免疫印迹检测的方法。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种分泌抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

本发明的目的之二是提供由所述杂交瘤细胞株分泌产生的抗猪GSDMD蛋白单克隆抗体；

本发明的目的之三是提供所述单克隆抗体的用途。

为了达到以上目的，本发明所采用的技术方案为：