[发明专利]一种显微成像技术评价地黄炮制质量的方法

说明书

本发明公开了一种基于显微成像技术评价地黄炮制质量的方法，具体为分别称取生地黄与熟地黄粉末置载玻片上，加水合氯醛试液，盖上盖玻片后于烘箱内加热，冷却后于显微镜下拍摄其显微特征图，提取显微特征色度值L*、a*、b*，计算总色度值E*ab，利用偏最小二乘‑判别分析确定主要差异性显微特征，通过Fisher判别分析建立生地黄与熟地黄的判别函数和判别规则，根据判别函数和判别规则确定炮制质量；本发明利用显微成像技术测定生地黄与熟地黄的显微特征颜色，可以有效的运用于以生地黄与熟地黄为原料的丸剂、散剂、胶囊剂等中成药的质量评价，为生地黄与熟地黄质量评价研究提供借鉴和参考，在一定程度上解决了现有判别手段主观性强样品处理复杂、检测成本高的问题。

技术领域

本发明属于中药品质分析技术领域，具体涉及一种显微成像技术评价地黄炮制质量的方法。

背景技术

中药炮制是中医临床用药特色，中药炮制品质量关乎中医临床疗效。中药经过炮制后，除外观性状、化学成分及药理作用与生品有显著性差异外，其显微特征颜色也发生了显著变化，但目前鲜有针对中药生、制品显微特征颜色的量化研究报道。

生地黄为玄参科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch.的干燥块根，熟地黄为生地黄经酒蒸或清蒸法炮制而成。生地黄炮制成熟地黄后，药性由寒性转变为温性，作用由清转化为补，味由苦转甜。生地黄具有清热凉血，养阴生津的作用，熟地黄则具有滋阴补血的作用。《中国药典》2020年版一部收载了熟地黄的炮制方法，但对蒸制时间无明确规定，多数仅以“黑如漆，甜如饴”等笼统的性状变化作为达到炮制终点的标准，实际生产中难以掌握。《中国药典》2020年版规定：生地黄中梓醇含量不得少于0.20%，地黄苷D含量不得少于0.10%；熟地黄中地黄苷D含量不得少于0.050%。研究表明，地黄经酒蒸或清蒸后地黄苷D含量降低，因此，以地黄苷D含量作为熟地黄含量测定指标难以反映地黄炮制后药效的改变。

中药质量传统经验鉴别法依赖于人的感官评价，而个人存在感官敏感程度的差异，主观性强、个体差异大，尤其是当粉末作为丸剂、散剂、胶囊剂等中成药的原料入药后，更难以评价投药饮片的质量。现代仪器检测手段又存在样品处理过程繁琐，仪器操作复杂，检测成本高的问题。目前对生地黄与熟地黄的显微鉴别内容多用主观性词汇对显微特征颜色进行描述，如木栓细胞淡棕色，这种描述依赖感官评判，主观性强。为了增强生地黄与熟地黄显微鉴别的客观性，提升生地黄与熟地黄的质量评价标准，有必要对生地黄与熟地黄显微特征颜色的差异性进行数字化研究，建立生地黄与熟地黄的显微特征客观化、数字化的质量评价指标，为生、熟地黄质量标准研究提供借鉴。

发明内容

针对现有技术中对生、熟地黄显微鉴别主观性强，未见生地黄与熟地黄显微鉴别的客观指标的问题，本发明提供了一种基于显微成像技术评价地黄炮制质量的方法，通过显微特征颜色的数字化表达有效地对生地黄与熟地黄进行判别，为生、熟地黄质量标准研究提供客观依据。

本发明通过以下技术方案实现：

一种基于显微成像技术评价地黄炮制质量的方法，包括以下步骤：

（1）分别称取生地黄与熟地黄粉末置于载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，置于烘箱内加热，冷却后置于显微镜下拍摄其显微特征图，提取显微特征的色度值L^*、a^*、b^*，并计算总色度值E^*ab，利用偏最小二乘-判别分析确定主要差异性显微特征，通过Fisher判别分析建立生地黄与熟地黄的判别函数和判别规则；

（2）分别称取待测生地黄或熟地黄粉末置于载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，置于烘箱内加热，冷却后置于显微镜下拍摄其差异性显微特征图，提取显微特征的色度值L^*、a^*、b^*，并计算总色度值E^*ab，根据步骤（1）中确定的判别函数和判别规则确定地黄的炮制质量；