[发明专利]基于液相芯片技术的7种猪繁殖障碍疾病相关病毒检测用引物探针、试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了基于液相芯片技术的7种猪繁殖障碍疾病相关病毒检测用引物探针组、试剂盒及其应用，属于病毒检测技术领域。本发明提供的引物探针组，包括猪瘟病毒检测引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒检测引物探针、猪圆环病毒2型检测引物探针、猪圆环病毒3型检测引物探针、猪细小病毒检测引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒检测引物探针和猪伪犬病病毒检测引物探针。采用引物探针以及所建方法检测样本，检测结果与单个病毒荧光定量PCR方法检测结果高度一致，具有检测特异性好、检测结果重复性好、检测灵敏度高的特点，可同时对7个猪繁殖障碍疾病相关病毒进行检测，且具有通量高、检测成本低的特点。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及基于液相芯片技术可同时检测7种猪繁殖障碍疾病相关病毒用的引物探针组、试剂盒及其应用。

背景技术

猪繁殖障碍性疾病，是以妊娠猪发生流产、死胎、木乃伊胎、产出无活力的弱仔、畸形儿、少仔和公母猪的不育症为其主要特点。感染病毒是引起该类疫病的主要原因之一。研究显示猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型和3型等均能引起猪繁殖障碍疾病的发生。

早期快速、准确的鉴别诊断对阻断猪病毒性繁殖障碍疾病扩散蔓延具有重要意义，可为预防控制该类疫病提供技术支撑。目前用于猪病毒性繁殖障碍疾病病原体的检测方法主要为PCR和荧光定量PCR方法，尽管二者的检测速度和灵敏度较传统的病毒培养及抗原检测方法有了明显提高，但鉴于病毒性猪繁殖障碍疾病病原体种类繁多，而当前临床应用中的PCR和荧光定量PCR检测方法单次只能检测单一或三种以内的该类疾病的病原体，无法同时对多种病原体进行筛查，若要筛查必须通过多次荧光定量PCR或PCR方法检测后才能明确，费时费力，且检测成本较高。此外随着我国养猪业的集约化程度越来越高，养殖规模越来越大，近年来猪病毒性繁殖障碍疾病的流行和病原体种类的增多，猪病毒性繁殖障碍疾病的流行病学调查、临床检测、检验检疫样品数量逐年增加，对检测效率提出了更高的要求。同时，当前猪病毒性繁殖障碍疾病病例中多种病原体的协同感染现象越来越普遍，现阶段猪繁殖障碍疾病相关病毒的检测方法和技术已经难以适应当前鉴别诊断以及大规模筛查分类的需要，因此研发一种高通量、快速、灵敏、经济的猪病毒性繁殖障碍疾病相关病原体检测方法迫在眉睫。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种基于液相芯片技术可同时检测7种猪繁殖障碍疾病相关病毒的引物探针组、试剂盒及其应用，能够实现对猪瘟病毒、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪细小病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪犬病病毒的鉴别和检测。

本发明提供了可同时检测7种猪繁殖障碍疾病相关病毒的引物探针组，包括猪瘟病毒检测引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒检测引物探针、猪圆环病毒2型检测引物探针、猪圆环病毒3型检测引物探针、猪细小病毒检测引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒检测引物探针和猪伪犬病病毒检测引物探针；

所述猪瘟病毒检测引物探针包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的反向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的探针；

所述美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒检测引物探针包括核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示的正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的反向引物和核苷酸序列如SEQ IDNO:6所示的探针；

所述猪圆环病毒2型检测引物探针包括核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示的正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示的反向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示的探针；

所述猪圆环病毒3型检测引物探针包括核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示的正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示的反向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示的探针；