[发明专利]一种新型黑猩猩腺病毒载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种黑猩猩腺病毒，其特征在于，所述的该病毒包括高变区HVR，其中，所述的高变区HVR包括如序列编号Seq ID NO.9、Seq ID NO.10、Seq ID NO.11、Seq ID NO.12、Seq IDNO.13、或者Seq ID NO.14所示的中的任意一条或多条所示的核苷酸序列，或者与以上序列具有同源性大于50％的核苷酸序列。

2.权利要求1所述的黑猩猩腺病毒，其特征在于，所述的腺病毒包括高变区HVR7-9的区域，所述高变区HVR7-9具有如序列表Seq ID NO.15所示的核苷酸序列。

3.如权利要求1-2任一项所述的黑猩猩腺病毒，其特征在于，高变区HVR具有如序列表Seq ID NO.7所示的核苷酸序列，或者与该序列同源性大于50％的核苷酸序列。

4.如权利要求1-3任一项所述的黑猩猩腺病毒，其特征在于，所述的病毒还包括保守区域。

5.一种黑猩猩腺病毒，其特征在于，该病毒的保藏编号为CCTCC NO：V202120，编号为sAd-AY01的毒株。

6.如权利要求5所述的黑猩猩腺病毒，其特征在于，具有如序列表Seq ID NO.1所示的核苷酸序列。

7.一种复制缺陷型黑猩猩腺病毒载体，其特征在于，如权利要求1～6任一项所述的黑猩猩腺病毒，保守区域缺失基因。

8.如权利要求7所述的复制缺陷型黑猩猩腺病毒载体，其特征在于，所述缺失的基因包括E1、E2A、E2B、E3、E4中的任意一种或多种。

9.如权利要求8所述的复制缺陷型黑猩猩腺病毒载体，其特征在于，缺失E1和E3基因，具有如序列表Seq ID NO.4所示的核苷酸序列。

10.一种复制缺陷型黑猩猩腺病毒载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建穿梭质粒psAd-shuttle，线性化后与如权利要求1～6任一项所述的黑猩猩腺病毒基因进行同源重组，制备环状质粒psAd；

(2)敲除psAd的E1基因，获得E1基因缺失的黑猩猩腺病毒载体psAd△E1；

(3)敲除psAd△E1的E3基因，获得缺失E1和E3基因的黑猩猩腺病毒载体psAd△E1△E3。

11.如权利要求10所述的构建方法，其特征在于，步骤1)所述的穿梭质粒psAd-shuttle具有如序列表Seq ID NO.3所示的核苷酸序列；环状质粒psAd具有如序列表Seq ID NO.2所示的核苷酸序列。

12.如权利要求11所述的构建方法，其特征在于，步骤2)通过CRISPR/Cas9酶切psAd的E1基因，并插入含有PsiI酶切位点的HRPT序列，再经纯化和连接，获得psAd△E1；所述HRPT序列具有如序列表Seq ID NO.5所示的核苷酸序列。

13.如权利要求12所述的构建方法，其特征在于，步骤3)通过CRISPR/Cas9酶切psAd△E1，获得的产物与融合片段pVIII-U-exon进行无缝克隆，获得psAd△E1△E3；所述融合片段pVIII-U-exon具有如序列表Seq ID NO.6所示的核苷酸序列。

14.一种疫苗，其特征在于，在如权利要求7～9任一项所述的复制缺陷型黑猩猩腺病毒载体的基因缺失区，包含目的基因。

15.如权利要求14所示的疫苗，其特征在于，所述基因缺失区包括E1、E2A、E2B、E3、E4中的任意一种或多种。