[发明专利]一种采用基准样品对同系列化合物进行定量和评价的方法

说明书

本发明提供了一种采用基准样品对同系列化合物进行定量和评价的方法；包括制备基准样品，基准和待测样品基质相同，且涵盖了各个待测样品中所有目标分析物；在待测样品中分别加入同位素标签b，在基准样品中加入同位素标签a；混合后进行质谱分析，得到和目标分析物一一对应的系列内标物和目标分析物的峰面积信号；同时，通过衍生试剂标签产生的特定质谱信号，提取所有的系列目标分析物和对应的内标物信号，将复杂样品中的系列化合物形成了一一对应的标准数据集，通过算法、数学变换或者模型来评价待测样品。本发明解决了复杂样品系列化合物参考区间确定过程复杂，需要标准品和内标以及基质干扰等系列的问题，且具有灵敏度高、可靠性高等优点。

技术领域

本发明属于样本检测技术领域，涉及一种采用基准样品对同系列化合物进行定量和评价的方法，尤其涉及一种采用基准样品对复杂样品中所有同系列化合物进行定量和评价的方法，用于实现样品中已知和未知的同系列化合物的实时快速定量和评价。

背景技术

在样品尤其是生物样品中，通常会存在大量的具有类似特征的化合物，例如有机酸、氨基酸、脂肪酸、脂质等等，这一类的化合物自成体系而且数目众多，虽然根据前期的科学研究，已经知道了部分化合物的分子式和结构式，但是随着科学的进步，还有更多的未知化合物被发现，而且这些化合物同样具有生物学的意义，对于生命体起着重要的作用。

对于样品的分析工作，目前仅用有限的一个或者几个化合物去表征一个样品的特点和性质，变得越来越受到各种挑战，随着对于生命的理解越来越多，通过分析手段全面地去表征一个样品，测定样品中所有相关的化合物（包括已知的和未知的化合物）成为必然的趋势和行业对分析工作的要求。

但是分析所有的相关化合物存在以下的挑战和问题： 1）通常样品中一系列的化合物数目众多，每一类都有至少几十个，通常上百个化合物。为了测定这些化合物的含量，一般需要所有这些化合物的相应标准品。对于已知的化合物，采购所有的标准品本身也是一个挑战，不一定所有的化合物都有商业化的标准品可以提供，通常只有常见的化合物，商业公司才会开发标准品进行销售，更进一步，标准品的价格昂贵，采购所有标准品通常需要大量的经费，标准品通常还有保质期，通常只有2年之内的有效期；2）为了能够准确定量，除了化合物本身的标准品，很重要的是需要每个化合物的同位素内标物，因为每个目标化合物的结构不同，所以对应的同位素内标物也不相同，同位素内标的合成成本远远大于普通的化合物标准品，因此价格原高于化合物本身，而且合成困难，要想购买到各个化合物对应的同位素内标物是非常困难的，通常情况下是不可能实现的； 3）样品，包括生物样品、食品样品、环境样品、药学样品、材料样品等，要想准确定量，都需要考虑到基质效应带来的影响，基质效应通常都会直接影响到结果的准确测定，为了排除基质效应的影响，通常需要采用相同基质的所有化合物的标准品来计算待测样品的含量才是准确可靠的，采用不含基质的标准品或者含有不一样的基质的标准品来计算样品含量，一定会对结果造成较大的偏差；4）除了以上已知化合物存在的问题，针对这一同系列化合物中没有标准品的化合物或者未在考虑中未知的化合物，来进行定量更是困难。因为在这种情况下，首先需要把样品中的未知化合物找出来，其次这部分化合物没有标准品进行对照和含量测定，更不要提也没有同位素内标。这种情况下，不仅这些化合物不能被测定，而且这些化合物的有意义的含量很容易被忽略掉，造成样品信息不全面，一叶障目。5）另外，很重要的是，在临床生物样品分析时，需要确定每个化合物的参考区间，行业通常遵守的规范是CLSI C28-A或者EP28-A3C《Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the ClinicalLaboratory; Approved Guideline—Third Edition》来建立每个指标的参考区间，但是针对生物样品中一系列化合物，例如几百个化合物，要建立每个化合物的参考区间，工作量非常地庞大，而且在这么多的指标同时定量的情况下，更有价值的是这些化合物的变化情况，而不是这些化合物的绝对含量，因此，发明人认为实际上也没有这个必要针对每个化合物来设立参考区间，徒增没有必要的工作量。