[发明专利]用于抗肿瘤的红缘拟层孔菌提取物的提取方法及其应用

说明书

本发明公开了一种用于抗肿瘤的红缘拟层孔菌提取物的提取方法，具体包括如下步骤：步骤1，将红缘拟层孔菌子实体洗净、烘干、拆块、粉碎，得到絮状的红缘拟层孔菌粉体；步骤2，将步骤1所得产物与有机溶剂按照1g：20～40mL的比例混合均匀，得到混合物；将混合物超声提取得到超声处理混合物，将超声处理混合物抽滤、浓缩，得到红缘拟层孔菌提取物。本发明提取出的提取物能够逆转抗肿瘤化疗药的耐药性，提高抗肿瘤药物的治疗效果。

技术领域

本发明属于癌细胞抑制研究技术领域，涉及一种用于抗肿瘤的红缘拟层孔菌提取物的提取方法。

背景技术

结肠癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤，流行病学观察和实验研究提示肥胖和高脂、高蛋白、低纤维的饮食习惯是诱发结直肠癌的高危因素。此外，结直肠癌发病隐匿、生长缓慢，可能需要十几甚至几十年才表现出明显临床症状，我国结直肠癌发病的中位年龄为45岁左右，60-75岁达到峰值。随着我国社会经济水平的提高，城乡居民饮食结构中高脂低纤比例上升，加之社会人口老龄化趋势的加剧，结直肠癌有可能成为我国最严重的恶性肿瘤，严重影响人民群众健康的同时为家庭和国家造成沉重的经济负担。结肠癌发病早期没有明显症状，多数患者确诊时往往已经处于进展期，手术切除局部瘤块结合化疗成为临床治疗结肠癌的重要手段，以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为基础的多种药物联合治疗被认为是现阶段治疗结肠癌的标准化疗方案。但癌细胞对此类高选择性单靶点药物往往产生多药耐药(multidrug resistance,MDR)现象，这正是恶性肿瘤化疗失败的主要原因，亦成为癌症治疗的瓶颈。化疗增敏剂(chemosensitizer,CS)可逆转耐药、增强抗肿瘤药物对肿瘤细胞的杀伤作用或降低其对正常组织细胞毒性，从而获得显著的临床疗效。因此，探寻低毒、高效的化疗增敏剂为开发新型抗肿瘤药物另辟蹊径，且被寄予厚望成为当前的研究热点和亟待解决的重大问题。

红缘拟层孔菌Fomitopsis pinicola(Swartz.：Fr.)Karst.为担子菌纲Basidiomycetes非褶菌目Aphyllophorales多孔菌科Polyporaceae拟层孔菌属Fomes，又名红缘层孔菌、红缘多孔菌、红缘树舌、红带菌等，其作为止血、消炎、降血糖、降血脂的传统用药在俄罗斯、日本、韩国等地区被人们熟知。《中国药用真菌》记载，红缘拟层孔菌味微苦、性平，无毒，能祛风除湿、解热、强心，补肺益肾、和胃健脾、安神定志、扶正培本。随着科技的发展，自20世纪60年代始，国内外学者从红缘拟层孔菌中分离出38种三萜类化合物，以及多糖类、脑苷脂类、芳香类化合物，还有单萜、倍半萜、油酸、亚油酸、棕榈酸、纤维素、半纤维素和果胶等成分。随着研究方法的不断进步，对红缘拟层孔菌抗肿瘤作用的报道也层出不穷，例如上世纪80年代，中日两国学者曾报道红缘拟层孔菌多糖能够通过激活机体非特异性免疫功能杀伤小鼠移植性肉瘤S180，发挥抗癌功效；2006年至今，多个研究组通过实验证明红缘拟层孔菌子实体及其体外培养的菌丝体的氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取物均能不同程度抑制体外培养的宫颈癌(Hela细胞)、乳腺癌(MCF-7、MDA-MB-231细胞)、肝癌(SMMC-7721、Hep 3B、SNU185、SNU354、HepG2细胞)、结肠癌(SW-480、HCT-116细胞)、胃癌、肺癌(A549细胞)细胞的增殖，同时还能够降低H22荷瘤小鼠体内肿瘤的增殖速率，延长其生存期，并激活非特异性免疫功能实现抗肿瘤作用。随着研究的深入，红缘拟层孔菌不仅能诱导多种肿瘤细胞发生凋亡，当它与顺铂联合作用后，小鼠肉瘤S180细胞的存活率下降至顺铂单独使用的半数以下。该研究结果提示红缘拟层孔菌可能具有化疗增敏的潜在价值，有可能为解决临床化疗瓶颈-肿瘤耐药提供新的治疗思路，然而截至目前，有关红缘拟层孔菌联合化疗药物的相关研究鲜有报道，就其逆转肿瘤耐药或化疗增敏的进一步研究证据和相关作用机制稀缺。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于抗肿瘤的红缘拟层孔菌提取物的提取方法，该方法提取出的提取物能够逆转抗肿瘤化疗药的耐药性，提高抗肿瘤药物的治疗效果。

本发明所采用的技术方案是，用于抗肿瘤的红缘拟层孔菌提取物的提取方法，具体包括如下步骤：