[发明专利]一种肿瘤抗原CA125的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 202110769422.5 | 申请日： | 2021-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN113462734A | 公开（公告）日： | 2021-10-01 |
| 发明（设计）人： | 穆海东;汪宁梅;李敏 | 申请（专利权）人： | 上海裕隆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C12N5/09;C07K14/47;C07K1/16;C07K1/14;G01N33/574;G01N33/68 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司 37205 | 代理人： | 侯绪军 |
| 地址： | 200000 上海市徐汇*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肿瘤 抗原 ca125 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种肿瘤抗原CA125的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)细胞培养：复苏OVCAR-3细胞到RPMI-1640培养基中，加20％FBS，5％CO2培养，1：3传代，细胞继续生长；
(2)抗原表达：细胞生长到足量阶段后换液，使用RPMI-1640培养基加1％FBS生长，进行抗原表达；
(3)抗原纯化：收集细胞培养的上清，离心后去除残留的细胞得到清澈的上清溶液，使用截留分子量50kDa的浓缩管在3000rpm转速下离心浓缩所述上清溶液，运用蛋白快速纯化仪分子筛纯化的方法，使用Superdex200 16/60分子筛纯化柱进行纯化并收集组分。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)细胞表达为复苏106数量的OVCAR-3细胞到细胞培养瓶T25中培养，每周换液1～2次。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)的复苏方法为将从液氮里取出的冻存细胞平稳地在37℃水浴锅中晃动，融化后将细胞转移到离心管中，加入培养基，离心后去除上清，用培养基重悬细胞，然后转移到细胞培养瓶中，十字交叉晃动，使细胞分散均匀。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，待细胞长到80％以上时1：3传代。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)纯化使用的缓冲液体系为PBS，pH7.4，10％甘油，50mM甘氨酸。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)使用Superdex200 16/60分子筛纯化柱纯化时，控制流速为1mL/分钟。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)纯化36分钟后开始收集组分。
8.一种肿瘤抗原CA125在检测试剂领域的应用，其特征在于，所述肿瘤抗原CA125采用如权利要求1～7任一所述的制备方法制得。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用为将肿瘤抗原CA125作为校准品和/或标准品使用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海裕隆生物科技有限公司，未经上海裕隆生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110769422.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种金属涂层加工用喷涂装置及其喷涂方法
- 下一篇：一种高度可调的垃圾桶
