[发明专利]一种T7噬菌体识别的锚定序列、DNA疫苗重组质粒及应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种T7噬菌体识别的锚定序列、DNA疫苗重组质粒及应用。本发明利用基因工程方法，调取T7噬菌体基因组左右两侧重复序列中的基因片段，并进行优化组合拼接成候选锚定序列，然后将其插入DNA疫苗质粒载体；建立荧光定量PCR检测方法，评价T7噬菌体对携带候选锚定序列的DNA疫苗载体的包裹效率，最终确定最佳锚定序列。应用T7噬菌体识别锚定序列并包裹DNA疫苗载体，并在细胞上验证T7噬菌体介导DNA疫苗载体转运、表达。本发明的携带锚定序列的DNA疫苗载体可独立于T7噬菌体进行基因的插入或替换，操作方便、运用广泛。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种T7噬菌体识别的锚定序列、包含该锚定序列的DNA疫苗重组质粒、包含该DNA疫苗重组质粒的噬菌体宿主菌株、一种包裹、转运DNA疫苗载体的方法，以及它们的应用，具体涉及从T7噬菌体基因组中筛选锚定序列并插入DNA疫苗载体，验证T7噬菌体对携带锚定序列的DNA疫苗载体的包裹能力，噬菌体转运DNA疫苗载体进入细胞实现外源基因的表达。

背景技术

DNA疫苗是上世纪90年代发展起来的一种新型疫苗，是指将含有抗原编码基因的真核表达载体导入细胞，通过胞内表达抗原从而诱导机体产生免疫反应。该免疫途径不仅能激发体液免疫反应，还能诱导高水平的细胞免疫，尤其是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应，在疾病的防治中具有较大优势。DNA疫苗作为第三代疫苗的代表有着广阔的前景，但DNA疫苗在进入细胞前都易受到体内各种酶的消化而逐渐被降解，从而导致有效进入细胞内的DNA疫苗数量骤减，免疫保护效率不尽如人意。虽然可以通过生物材料包裹和改进注射方式等策略提高DNA疫苗免疫效率，但终因工艺和成本等因素制约而难以推广，故而创新DNA疫苗转运技术成为了当前和今后的研究热点。

T7噬菌体是一种感染大肠杆菌的烈性噬菌体，在大肠杆菌胞质内进行复制、组装，其核酸物质被包裹在直径约为50nm的头部衣壳内。衣壳内部空间可以用来装载外源DNA疫苗载体，犹如给原本裸露的DNA疫苗穿上了一件盔甲。利用T7噬菌体作为DNA疫苗的转运载体，容易被免疫细胞识别、吞噬、降解，其噬菌体颗粒的不对称性有利于诱发T细胞依赖的免疫反应。噬菌体颗粒本身稳定性强，对理化因素有很强的抵抗力，在体液环境中保持稳定从而有效地保护内部包裹的DNA疫苗载体，进而高效地将DNA疫苗载体转运到细胞内实现抗原表达。

公开于该背景知识的信息旨在增加对该发明的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的就是为了解决DNA疫苗载体在转运过程中遇到的困难而提供一种T7噬菌体识别的锚定序列、DNA疫苗重组质粒、T7噬菌体包裹、转运DNA疫苗载体的方法及应用。

为了实现上述目的，本发明的第一方面提供一种T7噬菌体识别的锚定序列，所述锚定序列为SEQ ID NO.1所示。具体地，本发明基于T7噬菌体复制、组装过程的机理，从其基因组中遴选T7噬菌体组装过程中的识别区域，并进行优化组合，最终确定一段锚定序列，如SEQ ID NO.1所示。

本发明的第二方面提供一种具有T7噬菌体识别的锚定序列的DNA疫苗重组质粒，该DNA疫苗重组质粒包括DNA疫苗载体和上述的T7噬菌体识别的锚定序列。

本发明对所述DNA疫苗载体没有特别限定，可选自pcDNA、pEGFP、pSV2、pBV、pJV或pBJ。优选地，所述DNA疫苗载体为pcDNA3.0。

本发明的第三方面提供一种噬菌体宿主菌株，该噬菌体宿主菌株中导入有上述的DNA疫苗重组质粒。所述菌株可以为大肠杆菌BL21。