[发明专利]基于等温扩增的新型冠状病毒的快速检测方法

权利要求书

1.基于等温扩增的新型冠状病毒的快速检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：

第一步：使用生物信息学技术设计引物和探针；

其中，设定扩增片段400bp～450bp，引物探针GC含量在40％～60％之间，并且引物探针内部及引物探针之间不产生二聚化；

第二步：使用不同的引物配对对目的序列进行扩增，然后通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙啶显色筛选出扩增效率最高的引物组合；

第三步：对探针内部添加THF，并对其上游的胸腺嘧啶进行荧光修饰，下游添加淬灭基团，获得荧光探针，随后使用扩增序列内部的不同探针进行等温扩增并检测荧光信号，从而确定最佳的引物和探针组合；

第四步：对探针内部添加THF，并对其5’端碱基进行荧光修饰，同时下游引物进行生物素修饰，获得适用于层析试纸条的引物探针；

第五步：向反应体系中各加入2μl上游引物，下游引物和探针(10μM)，同时在每50μl体系中加入1U纯化RecA重组酶以及1U纯化单链DNA结合蛋白，并向体系中补充适量浓度聚乙二醇及氯化钾氯化镁和DNTP；

第六步：在42℃水浴锅或实时荧光定量PCR中进行反应，PCR仪器设置为42℃、2min，42℃40Sec/Cycle，40Cycle，检测FAM通道和HEX通道荧光。

2.根据权利要求1所述的基于等温扩增的新型冠状病毒的快速检测方法，其特征在于，能够检测新冠病毒核酸样本的探针组合序列如下：

N256For：ACTACCGAAGAGCTACCAGACGAAT

N689Rev：GCCTTTACCAGACATTTTGCTCTCA

Probe N645 exo：GGTGATGCTGCTCTTGCTTTGCTGCTGCTTGACAGATTGAACCA

S2531For：TGCTGCTAGAGACCTCATTTGTGCAC

S2850Rev：AAAGCTTGTGCATTTTGGTTGACCAC

Probe S2560 exo：AACGGCCTTACTGTTTTGCCACCTTTGTCACAGATGAAATGA。