[发明专利]一种NLRP3启动子甲基化的检测引物组合物、应用及检测方法在审
| 申请号： | 202110773953.1 | 申请日： | 2021-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN113416783A | 公开（公告）日： | 2021-09-21 |
| 发明（设计）人： | 邓务国;龙谦;李振江 | 申请（专利权）人： | 湖南灵康医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 长沙楚为知识产权代理事务所(普通合伙) 43217 | 代理人： | 李大为 |
| 地址： | 410205 湖南省长沙市高新开发*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 nlrp3 启动子 甲基化 检测 引物 组合 应用 方法 | ||
1.一种NLRP3启动子甲基化的检测引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括上游引物cg21919599-F、下游引物cg21919599-Rbio和测序引物cg21919599-S，所述cg21919599-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述cg21919599-Rbio的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述cg21919599-S的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的一种NLRP3启动子甲基化的检测引物组合物，其特征在于，所述NLRP3启动子甲基化位点为cg21919599，所述cg21919599位于基因启动子转录起始位点上游2789bp处。
3.权利要求1所述的NLRP3启动子甲基化的检测引物组合物在制备NLRP3启动子甲基化检测工具中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测工具包括但不限于作为单独检测试剂、检测试剂盒。
5.权利要求1所述的NLRP3启动子甲基化的检测引物组合物在制备肾癌检测工具中的应用。
6.根据权利要求3-5任一所述的应用，其特征在于，所述NLRP3启动子甲基化位点为cg21919599，所述cg21919599位于基因启动子转录起始位点上游2789bp处。
7.一种NLRP3启动子甲基化的检测工具，其特征在于，所述工具包括权利要求1所述的引物组合物。
8.利用权利要求1所示的引物组合物的检测NLRP3启动子甲基化的方法，其特征在于，包括以下步骤；
S1、待测样本DNA的提取；
S2、对步骤S1提取的样本DNA进行转化和纯化处理；
S3、利用上游引物上游引物cg21919599-F和下游引物cg21919599-Rbio对步骤S2得到的DNA进行PCR扩增；
S4、利用测序引物cg21919599-S对步骤S3得到的扩增后的PCR产物进行焦磷酸测序。
9.根据权利要求8所述的检测NLRP3启动子甲基化的方法，其特征在于，步骤S2中样本DNA的浓度大于50ng/μL，样本的总量大于500ng。
10.根据权利要求8所述的检测NLRP3启动子甲基化的方法，其特征在于，步骤S3中扩增的反应体系如下：
加水至25μL，反应程序为98℃10s，55℃30s，72℃30s，40个循环；72℃，1min；4℃，保持。
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