[发明专利]一种游离DNA保存试剂及制备方法

说明书

本发明提供一种游离DNA保存试剂及制备方法，涉及医学技术领域。该一种游离DNA保存试剂及制备方法，包括游离DNA试剂保存时，添加适量的无固定剂防腐剂，防止DNA的交联，并在环境温度下保存25天，然后在36.7℃下保存8天，模拟血液中DNA的原生环境，利于更好的保存游离的DNA，得到游离DNA保存试剂。通过采用良好的游离DNA试剂制备方法，实际操作步骤简捷，且利于的得到完整稳定的游离DNA,实际制备的游离DNA试剂品质良好，此外通过采用良好的游离DNA试剂保存方法，可以使游离DNA试剂保存完整且保存稳定，且不易发生基因组DNA片段化，利于进行对比试验。

技术领域

本发明涉及医学技术领域，具体为一种游离DNA保存试剂及制备方法。

背景技术

游离DNA，血中游离DNA简称循环核酸指循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性DNA。游离DNA大部分都是双链DNA分子，血中游离DNA片段远小于基因组DNA，片段长度集中在0.18～21kb之间。用于疾病的早期诊断，预后，检测。

目前，现有游离DNA保存试剂及制备方法在于实际应用时，缺乏良好的游离DNA试剂制备方法，实际操作步骤繁琐，且不利于的得到完整稳定的游离DNA,实际制备的游离DNA试剂品质不佳，此外缺乏良好的游离DNA试剂保存方法，无法使游离DNA试剂保存完整且保存稳定，且极易发生基因组DNA片段化，不利于进行对比试验。

为此，我们研发出了新的一种游离DNA保存试剂及制备方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种游离DNA保存试剂及制备方法，解决了上述问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种游离DNA保存试剂及制备方法，包括以下具体步骤：

S1.选取适量的新鲜动植物血液样本，将其置入培养基，向其中加入适量的高浓度盐酸溶液，进而破坏血液中的红细胞细胞外壁，此时再将其放入至差速离心机中，分离血液中的红细胞与白细胞，离心分离完毕后，收集血液中的白细胞；

S2.提取后的细胞溶液中添加适量的十二烷基硫酸钠溶液，用于进行细胞溶液中白细胞的裂解，可溶解细胞膜、核膜上的脂质成分，且可使血球蛋白质变性，进而与血球蛋白结合成絮状复合物沉淀；

S3.此时需要添加适量的盐酸与氯化钠配比缓冲液，配比为1：1.5，用于保证白细胞提取溶液的PH相对稳定，此时可通过胶头滴管进行滴入添加，并用玻璃棒进行不断的缓速搅拌，防止溶液PH陡然变化；

S4.再抽提上层悬浮液于一个新的培养基，通过向其内投入适量的酒精，由于酒精的物理特性为可以和水进行任意比例的混溶，利于夺取DNA周围的水分子，进而使失去水分子的DNA利于聚合收集并形成沉淀；

S5.此时将DNA的聚合沉淀进行离心洗涤工作，并调节适量的二价金属螯合剂，配合十二烷基硫酸钠使DNA的聚合沉淀一直保持良好的活性，使DNA游离，且利于与DNA酶中的钙离子和镁离子相结合，促使DNA酶失去活性，进而提取完整的DNA,最终经过干燥溶解工序，完成游离DNA试剂制备。

优选的，所述DNA溶解时需要以弱碱性的Tris或者TE，避免金属离子的干扰，且再提取或保存DNA时，采用Tris-HCl系统，使缓冲液中的EDTA更能稳定，进而保证核酸一级结构的完整稳定。

优选的，所述游离DNA试剂保存时，添加适量的无固定剂防腐剂，防止DNA的交联，并在环境温度下保存25天，然后在36.7℃下保存8天，模拟血液中DNA的原生环境，利于更好的保存游离的DNA，得到游离DNA保存试剂。