[发明专利]一种慢加急肝衰检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于试剂盒制备技术领域，公开了一种慢加急肝衰检测试剂盒及其制备方法，进行人CD103单克隆抗体的制备；进行CD103流式抗体检测试剂盒的制备；进行IL‑33Elisa检测试剂盒的制备；进行慢加急肝衰公式的创建。试剂盒由CD103单克隆抗体，红细胞裂解液，流式细胞洗涤缓冲液，96孔酶标板、12ml的酶标抗体工作液、12ml的10×标本稀释液、50ml的20×浓缩ELISA洗涤液、20ng/瓶2瓶的IL‑33标准品、12ml的底物工作液、12ml的第一抗体工作液以及12ml的终止液组成。本发明弥补当前市面上缺少慢加急肝衰发生前期诊断试剂盒的现状，为预测慢性肝病肝衰发生提供有力的检测工具。

技术领域

本发明属于试剂盒制备技术领域，尤其涉及一种慢加急肝衰检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

目前，慢加急性肝衰竭(Acute on chronic liver failure，ACLF)是在慢性肝病基础上由多种急性促发因素导致的肝功能急性严重受损，并发一个或多个器官功能衰竭的一组复杂临床症候群，病死率极高，是我国肝衰竭中最常见的类型。

2018年12月中华医学会再次对我国的《肝衰竭诊治指南》进行更新，将肝衰竭分为四类：急性肝衰竭、亚急性肝衰竭、慢加急性肝衰竭和慢性肝衰竭。由于我国是乙肝大国，在我国肝衰竭的主要病因是HBV再激活引起的ACLF。目前针对ACLF的治疗以内科支持治疗结合肝移植为主，但是内科综合治疗和人工肝治疗疗效仍不令人满意，肝移植作为目前最有效的治疗手段，却受到供肝来源稀缺、医疗费用高昂等诸多限制。由于治疗手段有限，若能在肝衰竭发生之前，对患者肝衰竭发生风险进行早期预测并及时干预，阻止疾病进展，无疑会有效改善患者预后，并减轻患者的经济负担；同时如果能针对ACLF发生的关键分子进行跟踪检测尽早预判治疗效果，也将进一步降低患者的死亡率。近年来，肝衰竭的早期预警日益引起人们的关注，肝衰竭前期概念的提出及其相关预警研究逐渐成为热点，但是现阶段临床还没有较为准确的ACLF早期预警试剂盒在临床应用，因此提供可在临床大规模应用的ACLF早期诊断试剂盒将提升临床治疗ACLF的成功率。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：当前市面上缺少慢加急肝衰发生前期诊断试剂盒，还没有较为准确的ACLF早期预警试剂盒在临床应用。

解决以上问题及缺陷的难度为：由于现阶段ACLF的免疫发生机制尚不清楚，没有较好的生物监测靶分子，同时由于ACLF患者无法取到肝组织因此现有市面上尚未有可以早期预测肝衰发生的方法和诊断试剂盒。

解决以上问题及缺陷的意义为：本发明研发的成功可以通过外周血早期预测肝衰的发生，弥补市面上缺少利用外周血预测ACLF发生的试剂盒，为ACLF患者的早期治疗提供新的检测手段，为临床ACLF的治疗提供依据。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种慢加急肝衰检测试剂盒及其制备方法，尤其涉及一种以人CD103流式抗体为核心的慢加急肝衰检测试剂盒及其制备方法。

本发明是这样实现的，一种慢加急肝衰检测试剂盒的制备方法，所述慢加急肝衰检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：

步骤一，进行人CD103单克隆抗体的制备；制备具有自主产权的CD103单克隆抗体，为本技术发明奠定物质基础。

步骤二，进行CD103流式抗体检测试剂盒的制备；规范简明的操作规范使本技术具备市场推广的可能性；外周血CD103检测的完成为步骤四联合外周血CD103和IL-33的表达预测ACLF的发生奠定基础。

步骤三，进行IL-33Elisa检测试剂盒的制备：规范简明的操作规范使本技术具备市场推广的可能性。IL-33检测的完成为步骤四联合外周血CD103和IL-33的表达预测ACLF的发生奠定基础。

步骤四，公式计算ACLF的发生概率，利用已有的研究数据建立ACLF发生计算公式，根据患者外周血CD103和IL-33的表达量计算ACLF发生的概率。