[发明专利]一种R-2HG用于制备抑制肿瘤药物的应用

说明书

本发明涉及肿瘤药物技术领域，尤其涉及一种R‑2HG的应用，其在制备抑制肿瘤药物中的应用；所述的抑制肿瘤药物为抑制胆管癌药物，本发明中R‑2HG通过改变信号传导而降低CCA细胞增殖，而ERα(雌激素通过雌激素受体α)改变FTO/m6A甲基化的ERα/miR‑16‑5p/YAP1信号传导，这项研究为由IDH1/2突变产生的R‑2HG的抗肿瘤分子机制提供了新颖的见解，并可能有助于开发更有效的新颖治疗策略，以治疗具有或不具有IDH1/2突变的CCA。

技术领域

本发明涉及肿瘤药物技术领域，尤其涉及一种R-2HG用于制备抑制肿瘤药物的应用。

背景技术

胆管癌(Cholangiocarcinoma,CCA)是起源于胆道上皮细胞的一类恶性肿瘤，是第二大最常见的原发性肝恶性肿瘤。根据解剖结构，CCA分为肝内CCA(ICC)和肝外CCA(ECC)。无痛性黄疸是门诊病人的主要原因。其主要特征是预后差和中位生存期短(约一年)。完整的手术切除与组织学阴性切除切缘和肝移植仍被认为是潜在治愈性治疗的主要手段。由于对肿瘤生物学和分子发病机制的进一步了解，致癌作用的特定基因排列已达成共识，而基因组分析也揭示了CCA中的遗传突变谱。这些基因异常中，在神经胶质瘤、急性髓细胞性白血病(AML)、软骨肉瘤和CCA的研究发现IDH1/2突变在CCA的发生和预后中发挥了重要作用。进一步研究发现，由突变的IDH1/2在三羧酸(TCA)循环中产生的(R)-2-羟基戊二酸(R-2HG)抑制了经典α-酮戊二酸(α-KG)依赖性双加氧酶的活性，改变了表观遗传，细胞外基质成熟和细胞信号传导。功能研究还发现，R-2HG可促进癌变，被认为是α-KG的竞争性合成代谢物。

一种副作用较小的药品，不但能够抗包括胆管癌在内的肿瘤还能使患者减少痛苦是十分具有实用价值的。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种R-2HG用于制备抑制肿瘤药物的应用。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种R-2HG的应用，其在制备抑制肿瘤药物中的应用；所述的抑制肿瘤药物为抑制胆管癌药物。

优选的，一种验证R-2HG抑制胆管癌细胞增殖的方法，包括以下步骤：

S1：先将2个CCA细胞系经过300μM R-2HG处理48小时，然后进行MTT细胞增殖实验；

S2：验证内源性R-2HG与外源性R-2HG的结果，应用慢病毒系统在QBC939细胞系中建立过表达的野生型IDH1和突变IDH1(R132H)，进行MTT细胞增殖实验和/或菌落形成实验；

S3：运用CRISPR/Cas9基因组编辑技术，在QBC939细胞系中构建杂合IDH1R132H突变(IDH1^R132H/WT)，通过MTT细胞增殖实验和集落形成试验检验IDH1^R132H/WTQBC939细胞中的内源性R-2HG功能；

S4：检索GEO数据库，获得一个IDH1/2突变的CCA肿瘤样本的微阵列数据集(GSE107102)，通过针对IDH1/2突变组和野生组的数据比对，获得了738个差异基因，随后，通过在线通路富集分析工具DAVID6.8，获得了排名前20的差异通路，最后，选择同细胞增殖相关联的四个通路，筛选出共同的差异基因：ERα、HIF-1α和GJA1，利用TCGA中临床样本数据，验证肿瘤预后同这3个差异基因的相关性；

S5：验证ERα是R-2HG的特定下游基因，在QBC939细胞中敲低ERα，再用R-2HG处理。