[发明专利]一种粪便样本核酸保存液及其制备方法

说明书

本发明提供了一种粪便样本核酸保存液及其制备方法，具体地，本发明提供了一种粪便样本核酸保存液，所述保存液含有变性剂、螯合剂、离子强度维持剂、抑菌剂和除味剂。用本发明的保存液处理粪便样本，可有效(a)保持粪便样本中的DNA核酸稳定；和/或(ii)灭活粪便样本中的细菌。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体地，涉及种粪便样本核酸保存液及其制备 方法。

背景技术

肠道，是人体的第二大脑，人体最大的“加油站”，也是人体内最大的排 毒器官和免疫器官，人体约99％的营养物质都是由肠道吸收，80％以上的毒素由 肠道排出体外，60-70％的免疫细胞都集中在肠道中抵抗外来菌与毒素的入侵， 包括巨噬细胞、T细胞、NK细胞、B细胞等。日常饮食中，大多数营养物质都在 小肠被吸收，而难于消化吸收的食物残渣进入大肠，最终形成粪便下移至直肠 排出。而随着生活水平的提高，人类进食肉食比例的增加、生活压力大、饮食 不规律，消化道的问题越来越突出。关于我国肠道健康状况的社会调查结果显 示，超过90％的人存在肠道健康问题。2009年，肠癌跃居国人十大癌症之首，几乎每天有288人死于大肠癌，平均每小时有12个人死于肠癌。肠道也是人体 最大的细菌库，肠道内微生物种群达500余种，数量10万亿以上。肠道微生物 是人体代谢反应的重要参与者，可帮助人体完成多种生理生化反应，肠道微生 物的失调与多种疾病的发生发展密切相关，例如肠道肿瘤、肠易激综合症 (IBS)、肥胖、糖尿病等。

近年来，随着分子生物学和核酸检测技术的日益发展，为研究肠道与人体 健康疾病之间的关系提供了有力的检测分析手段。粪便样本是肠道疾病研究和 肠道临床检测的重要样本来源。粪便中含有宿主脱落细胞，这些脱落细胞中常 含有癌变信号，粪便中脱落细胞的检测由于无创、无痛、且检测特异性高等特 征，常用于结直肠癌等消化道疾病的初筛普查，能更好地达到″早发现、早诊 断、早治疗″的目的，是最有效最节约成本的降低肠癌(结直肠癌)发病率和 死亡率的方法。肠道微生物研究的主要样本也是粪便样本，可以反应人体肠道 内微生物的共生状态。但是当粪便从人体排出后，样本中微生物的生存环境发生了很大的改变，从肠道获取营养物质的来源随之丧失，并且从无氧环境变成 了有氧环境，样本中的厌氧菌将会迅速死亡，非厌氧菌还能继续代谢和生长， 这会造成微生物的种类和丰度发生改变，不能很好的反应体内的真实状态。此 外，粪便样本成分复杂，含有大量蛋白酶、核酸酶及各种PCR抑制剂(如胆盐、 胆红素、腐殖质和色素)，使得粪便样本中的细胞及核酸极易受到破坏和降解。 因此，需要对粪便样品采取保护措施，使其微生物构成固定在离体时的状态， 真实反映肠道微生物的构成。传统采用低温-20℃—-80℃保存粪便样本，低温 冷冻保存可使样本中各种酶活力降低，减少样本中细胞(包括人脱落细胞和各 种微生物菌体细胞)和核酸的破坏降解，低温也能降低菌群的代谢和繁殖，能 在一定时间内较好地保持菌群的固有状态。但冷冻保存的样本保存时间短，样 本再度利用合格率低，并且样本运输和保存需要超低温设备和仪器的支持，保 存条件苛刻，成本高。如果受检者采集样本后不能立即低温保存，期间粪便样 本内的脱落细胞、核酸和微生物的总量、组成和相对丰度都有可能发生改变， 影响后续检测结果，不能准确的反应受检者肠道的真实状况。因此，需要一种 能够在常温下长时间有效保存粪便样本的粪便样本核酸保存液。另外，粪便样 本由于具有大量细菌和难闻的臭味，实验操作人员和临床检测人员对此类样本 接受意愿度比较差，这也是粪便类样本类型在临床推广应用过程中面临的一个 问题。