[发明专利]包虫病诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种包虫病诊断试剂盒，属于疾病诊断试剂盒领域。本发明的试剂盒将棘球蚴蛋白Eg95、AgB8/1、Em18去除信号肽后通过连接肽连接得到的融合蛋白作为捕获机体抗棘球蚴抗体的抗原，其不仅具有良好的检测包虫病的性能，还能同时分辨包虫病的两大类型：囊型包虫病(CE)和泡型包虫病(AE)，并能评估病灶大小。

技术领域

本发明属于疾病诊断试剂盒领域。

背景技术

棘球蚴病又称为包虫病，分为囊型包虫病(CE)和泡型包虫病(AE)，中国是全球高发地区之一，又以四川省患病率最高。包虫病缺乏灵敏、高效的早诊手段，加上疾病初期无明显症状，大部分病人确诊时已处于中晚期，治疗难度极大。

早期筛查、早期诊断是防控包虫病最重要的手段之一。目前的筛查手段仅有超声检查，早期发现率低、客观性差、人力物力要求高且耗时长。现有血清学检测手段特异性和敏感性不足，而新兴液体活检(棘球蚴特异DNA片段)检测条件要求高，短期内无法作为现场快速筛查手段。因此，有必要研发一种简便、快速、灵敏度高的诊断试剂盒来配合超声进行筛查，以提高早诊早治率，同时对高危、可疑的无典型影像结构特征的病例进行辅助诊断、鉴别诊断和高危人群监测、术后随访等。

天然抗原，如囊液粗抗原(EgCF)、头节抗原(EgP)等，提取工艺复杂，需大量养殖动物，产能低下且易污染环境。通过基因信息技术、重组技术等筛查出包虫病高表达的特异抗原基因工程菌种，从而获得重组抗原是目前包虫病诊断试剂盒研究的热点方向，包括rEm18、rAgB等。温浩等曾研发应用包含EgCF、EgP、AgB、Em2四种抗原成分的试剂盒，观察任意一种显示弱阳性即为阳性结果，但操作及结果解读较复杂，特异性为71％，交叉阳性时不易诊断。国外Lorenzo等一项多中心6种诊断试剂(EgCF，AgB，EgMDH等)比对后发现，诊断最高敏感性仅为81.9％。目前利用重组抗原制备的包虫病诊断试剂检测准确度还有待进一步提升。

另外，现有的诊断试剂只能大致做定性检测，难以对AE和CE进行区分，且难以评估包虫病的轻重程度。

发明内容

本发明要解决的问题是：提供一种新的包虫病抗原以及对应的诊断试剂盒。

本发明的技术方案如下：

一种重组蛋白，该蛋白是棘球蚴蛋白Eg95、AgB8/1、Em18去除信号肽后通过连接肽连接得到的融合蛋白。

如前述的重组蛋白，所述Eg95、AgB8/1、Em18的连接顺序是：N端-AgB8/1-Em18-EG95-C端；

所述连接肽序列为GGGGSGGGG。

如前述的重组蛋白，蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

表达前述重组蛋白的DNA。

一种重组质粒，所述重组质粒包括前述的DNA的序列。

一种包虫病诊断试剂盒，所述试剂盒包括抗包虫抗体的抗原，该抗原是前述的重组蛋白。

进一步地，所述试剂盒是间接ELISA诊断试剂盒，包括所述抗原、缓冲液、连接HRP(辣根过氧化物酶)的抗人IgG抗体、TMB(四甲基联苯胺)和酶标板。

前述的重组蛋白在制备包虫病诊断试剂盒中的用途。

如前述的用途，所述包虫病诊断试剂盒是区分囊型包虫病和泡型包虫病的试剂盒。

如前述的用途，所述包虫病诊断试剂盒是评估包虫病病灶大小的试剂盒。

本发明的有益效果为：

1)本发明试剂盒用与检测包虫病的检测准确度高，其灵敏度高达93.75％，特异度为83.33％；达到了市售试剂盒的水平。