[发明专利]circRNA PRDM5在钙化性主动脉瓣疾病的诊断试剂盒及治疗药物开发中的应用

说明书

本发明涉及circRNA PRDM5在钙化性主动脉瓣疾病的诊断试剂盒及治疗药物开发中的应用。本发明通过筛选一种人瓣膜间质细胞成骨分化相关的circRNA PRDM5并验证其应用，通过检测正常与钙化主动脉瓣组织中的circRNA PRDM5的表达水平，并对circRNA PRDM5基因进行细胞功能学研究，发现过表达circRNA PRDM5，可以显著促进人瓣膜间质细胞成骨分化能力，证明circRNA PRDM5及其表达产物可作为诊断钙化性主动脉瓣疾病的标志物，也可作为制备治疗钙化性主动脉瓣疾病药物的靶基因，为治疗主动脉瓣钙化提供新的非手术治疗方案。

技术领域：

本发明涉及生物医药领域，具体涉及circRNA PRDM5在钙化性主动脉瓣疾病的诊断试剂盒及治疗药物开发中的应用。

背景技术：

钙化主动脉瓣疾病(calcific aortic valve disease，CAVD)是一种高发病率和高死亡率的老年性进行性疾病，主要病理生理改变为主动脉瓣瓣叶纤维增生钙化从而导致瓣膜变硬并引起血流动力学改变，从而影响心脏功能。以往观点均认为CAVD是一种与年龄相关的退行性病变，是随着年龄增长，瓣膜组织的退化硬化过程。然而近年来的基础研究表明，CAVD是一种涉及内皮损伤，炎症细胞浸润、细胞外基质重塑以及瓣膜间质细胞成骨样分化等复杂病理改变的主动进展过程。瓣膜组织中的细胞主要包括瓣膜内皮细胞 (Valvularendothelial cells,VEC)、瓣膜间质细胞(Valvular interstitial cells,VICs)、瓣膜前体细胞等，已有研究证实瓣膜间质细胞成骨样分化所导致的钙盐增多可能是瓣膜钙化发生的重要始动因素。目前，CAVD缺乏有效的临床可用药物治疗方案，其主要治疗手段为主动脉瓣置换手术。然而，接受外科手术的患者必然会承担较高的医疗手术风险及经济负担。因此，探究 CAVD具体发病机制，采用非手术方法有效预防和/或治疗钙化性主动脉瓣疾病是目前临床治疗CAVD的迫切需求。

环状RNA(circRNA)是一类呈闭环结构且不受RNA外切酶影响的非编码 RNA。因为其在真核生物体内广泛表达，稳定，物种间保守性好且不易被降解而成为近年来非编码RNA研究领域的热点。已有大量的研究表明环状RNA在动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病中扮演重要角色，其上述特点使得circRNA在新型疾病诊断与治疗方法的开发应用上具有了非常广阔的前景。

circRNA PRDM5(circbaseID:hsa_circ_0005654)，其在基因组上的定位为：chr4:121675708-121732604，相应的线性基因为PRDM5(NM_018699)，环化序列长度为758个碱基。PRDM5，PR区域蛋白家族(PRDI-BF1 and RIZ domain containing,PRDM)成员5，属于锌指蛋白家族,是一类组织特异性的转录因子,有研究报道其与骨发育有密切关系,但是其在钙化性主动脉瓣疾病中的功能尚缺乏研究。

发明内容：

(一)解决的技术问题

针对上述背景，本发明通过研究circRNA PRDM5在钙化性主动脉瓣中的表达及其对人主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的调节作用，提出基于circRNA PRDM5基因的钙化性主动脉瓣疾病诊断试剂盒，以及提出以circRNA PRDM5基因及其表达产物作为靶点在制备或筛选治疗钙化性主动脉瓣疾病药物中的应用，为治疗主动脉瓣钙化提供新的非手术治疗方案。

(二)技术方案

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明公开第一方面，提供一种钙化性主动脉瓣疾病诊断试剂盒，包括检测circRNA PRDM5的试剂，所述circRNA PRDM5的CircbaseID为 hsa_circ_0005654。

进一步地，所述试剂盒包括扩增circRNA PRDM5的引物。