[发明专利]一种产酸菌NQ-P4及其应用与产酸菌NQ-P4的培养、鉴定方法

说明书

本发明公开了一种产酸菌NQ‑P4，该菌株命名为：假单胞菌(Pseudomonas sp.)NQ‑P4，已于2021年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO：17156。可在产酸中进行应用，且于温度为28℃、pH为6.5、转速为140rpm条件下利用发酵培养基进行恒温震荡培养产酸效率最高。本发明的产酸菌，能够为生物产酸提供菌种资源。

技术领域

本发明属于环境微生物技术领域，涉及一种产酸菌NQ-P4及其应用，还涉及该产酸菌NQ-P4的培养、鉴定方法。

背景技术

采矿业是继农业发展后产生的最重要的工业，尾矿是矿产开发中经选矿处理后的主要废弃物，尾矿随意处理导致周边区域重金属污染土壤问题日益严重，如何减少和消除矿山开采的重金属污染问题已引起人们的高度关注。

传统修复重金属污染土壤的方式主要专注于物理或化学方法，例如机械搬运法、化学法等，运用这些方法虽然能快速去除土壤中的重金属，但费用过高，运作困难，易造成二次污染，在实际工程中应用受到限制。而有些微生物主要存在于重金属污染严重的地方，有研究表明这些微生物不仅具有耐高浓度重金属毒性的能力，还具有分泌柠檬酸、草酸、苹果酸等小分子有机酸的能力，有机酸络合并溶解土壤中的重金属，从而降低土壤重金属的毒性，这类具有产酸能力耐受菌株的存在为受重金属污染场地的微生物修复措施提供了一种新方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种产酸菌NQ-P4及其应用与产酸菌 NQ-P4的培养、鉴定方法，为生物产酸并改良尾矿随意处理导致周边区域重金属污染土壤问题提供了菌种资源。

本发明所采用的技术方案是，一种产酸菌NQ-P4，该菌株命名为：假单胞菌(Pseudomonas sp.)NQ-P4，已于2021年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC NO：21592。

产酸菌NQ-P4的培养方法，具体为：

步骤1、菌株的分离培养

采集受重金属污染严重的土壤作为样品；

制备分离培养基：将酵母提取物5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0 g，琼脂20.0g，蒸馏水1L，混合后于121℃灭菌20分钟，接着倒平板待其凝固，制成无菌的分离培养基备用；

将采集的土壤样品与无菌水混合制备土壤悬液，土壤悬液经梯度稀释后涂布于分离培养基表面，并编号，于30℃恒温培养箱中培养 1-2d；

步骤2、鉴别产酸菌株

制备产酸鉴别培养基：将1.6％溴甲酚紫加入LB固体培养基，在121℃高温灭菌20分钟，倒平板待其凝固后制成无菌的产酸鉴别培养基备用，其颜色为紫色；

将步骤1培养后的菌株取出，观察菌株形态，挑选出不同形态菌落，划线培养于产酸鉴别培养基；

培养1-2d后产酸鉴别培养基由紫色变为黄色则说明该菌株具有产酸能力，若无变化则说明该菌株不具有产酸能力，挑取具有产酸能力的菌株多次划线于产酸鉴别培养基中，获取纯化后的单一菌株；

步骤3、扩大培养

配置LB液体培养基：将酵母提取物5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1L，混合后于121℃高温灭菌20分钟，待用；

将步骤2得到的产酸菌株挑取少量接种于LB液体培养基，于恒温振荡培养箱中以140rpm，保持28℃培养24h，得到大量产酸菌株。