[发明专利]一种长穗偃麦草3E染色体特异共显性KASP分子标记及其应用有效
| 申请号： | 202110785666.2 | 申请日： | 2021-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN113355449B | 公开（公告）日： | 2022-07-01 |
| 发明（设计）人： | 陈静;张紫晋;江迪;粟永英;杨婷;赵爽 | 申请（专利权）人： | 中国科学院成都生物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都坤伦厚朴专利代理事务所(普通合伙) 51247 | 代理人： | 吴亦雨 |
| 地址： | 610047 *** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 长穗偃 麦草 染色体 特异 显性 kasp 分子 标记 及其 应用 | ||
1.一种长穗偃麦草3E染色体KASP分子标记引物，其特征在于：包括KASP分子标记引物TWK3EL1，所述KASP分子标记引物TWK3EL1的引物包括小麦等位型下游引物3EL1-R1，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，包括长穗偃麦草等位型下游引物3EL1-R2，其核苷酸序列如SEQID NO:2所示，包括共用上游引物3EL1-F，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.一种利用权利要求1所述长穗偃麦草3E染色体KASP分子标记引物鉴定是否含有长穗偃麦草3EL染色体的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：
（1）提取待测样品的DNA，作为模板；
（2）利用权利要求1所述KASP分子标记引物TWK3EL1的引物对DNA模板进行PCR扩增，得扩增产物；
（3）分析扩增产物，利用KASP分子标记引物TWK3EL1只检测出碱基G，则鉴定为含有3E染色体长臂，利用KASP分子标记引物TWK3EL1只检测出碱基A，则鉴定为不含3E染色体长臂，利用KASP分子标记引物TWK3EL1同时检测出碱基G、A，则鉴定为小麦背景下含有3E染色体长臂。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于：步骤（2）所述PCR扩增的扩增体系为：100ng/µL DNA 1µL、2×KASP Maseter Mix 5µL、引物混合液0.7µL、ddH2O 3.3µL，总体系10µL；
所述引物混合液的制备方法为：吸取工作浓度为10μM的共用上游引物0.4µL、长穗偃麦草等位型下游引物0.15µL、小麦等位型下游引物0.15µL，混合均匀。
4.根据权利要求2所述方法，其特征在于：步骤（2）所述PCR扩增的扩增程序为：94℃预变性15min；94℃变性20s，65.7℃梯度退火并延伸1min，10个循环，每个循环退火及延伸的温度降低0.7℃；94℃变性20s，57℃退火并延伸1min，42个循环。
5.含有权利要求1所述长穗偃麦草3E染色体KASP分子标记引物的检测或鉴定试剂、检测或鉴定试剂盒。
6.权利要求1所述长穗偃麦草3E染色体KASP分子标记引物在小麦育种中的应用，其特征在于：在鉴定小麦-长穗偃麦草材料中是否存在长穗偃麦草3EL染色体的应用。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于：在选育抗黄矮病毒小麦和/或选育耐盐小麦中的应用。
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