[发明专利]一种鸽新城疫Ⅵb亚型阳性血清标准品及其制备方法

权利要求书

1.一种鸽新城疫Ⅵb亚型阳性血清标准品，其特征在于，所述阳性血清标准品是用鸽新城疫病毒Ⅵb亚型毒株疫苗接种健康阴性鸽所制备；

所述鸽新城疫病毒Ⅵb亚型毒株疫苗，其制备方法为：用鸽新城疫病毒Ⅵb亚型毒株LY/2020/Pi株接种SPF鸡胚培养，收获感染鸡胚液，经β-丙内酯灭活后，与矿物油佐剂混合乳化制成；

所述鸽新城疫病毒LY/2020/Pi株已于2021年6月17日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.20289。

2.权利要求1所述一种鸽新城疫Ⅵb亚型阳性血清标准品的制备方法，包括：

(1)免疫用健康阴性鸽的筛选：

1)选择饲养管理条件好且满足以下条件的鸽群：采食、饮水、生长发育均正常，羽毛有光泽，警惕性强，粪便呈螺旋状，且带一点白色尿素；无细菌、病毒、寄生虫发病史；

2)对试验鸽逐只采血，检测血清中新城疫抗体，剔除HI抗体高于1:4者；

3)应用鸽圆环病毒检测试剂盒、鸽腺病毒检测试剂盒、鸽痘检测试剂盒逐只检测各病毒感染情况，剔除阳性或可疑者；

4)筛选的试验鸽隔离观察一周，健康者可用于制备阳性血清；

(2)免疫抗原的制备：将Ⅵb亚型鸽新城疫病毒LY/2020/Pi株接种10日龄SPF鸡胚培养，收获感染鸡胚液，经β-丙内酯灭活后，与矿物油佐剂混合乳化制成；

(3)免疫程序为：1～2月龄阴性鸽首免，0.5mL/只；两周后二免，1.0mL/只；再两周后三免，1.0mL/只；最后一次采血时间为免疫后21～28天；

(4)阳性血清标准品的制备及纯化：采集后静置的鸽血用5000r/min离心10min，收集血清，经层析柱纯化后，用0.22μm一次性滤器过滤除菌后混合于无菌容器中，分装保存；

(5)阳性血清标准品检验：对制备的阳性血清标准品进行无菌、支原体、外源病毒、特异性检验、HI效价及中和效价测定；其中HI效价不低于1:128，中和效价不低于1:1600；同时与鸡新城疫抗原进行交叉反应实验，用LY/2020/Pi株抗原和La Sota株抗原分别与阳性血清标准品进行HI试验，HI效价分别为10.0log2和7.5log2。