[发明专利]一种快速血管化的组织工程皮肤及其构建方法

权利要求书

1.一种快速血管化的组织工程皮肤的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将人脐带来源内皮祖细胞配置成浓度为0.5-5×10⁶个/ml的细胞悬浊液，将装载有血管形成相关因子的微载体置于悬浊液中进行接种，所述微载体包括一种微球和两种微管，皆为中空结构，微球直径20-50μm，微管为取向纳米纤维管，第一类直径10-20μm，长度200-300μm，记作微管I，第二类直径30-50μm，长度50-100μm，记作微管II；三种微载体分开操作，接种了内皮祖细胞后，在培养箱中孵化1-2h，然后对每种细胞-微载体复合物单独进行动态灌注脉冲培养10-20d，得到内皮祖细胞-微球复合物、内皮祖细胞-微管I复合物和内皮祖细胞-微管II复合物；

S2、将新生儿包皮组织来源成纤维细胞接种于水凝胶后与内皮祖细胞-微球复合物和内皮祖细胞-微管I复合物混合均匀，平铺在培养容器中，厚度0.5-3mm，于37℃、5％体积分数CO₂的条件下培养7-10d，获得真皮层；

S3、将人脂肪组织来源脂肪干细胞接种于水凝胶后与内皮祖细胞-微球复合物、内皮祖细胞-微管I复合物和内皮祖细胞-微管II复合物混合均匀，平铺在培养容器中，厚度0.5-3mm，于37℃、5％体积分数CO₂的条件下培养1d后，开始成脂诱导培养，7-10d后获得脂肪层；

S4、两层组织按照S2的真皮层在上、S3的脂肪层在下的顺序组合培养10-20d，获得快速血管化的组织工程皮肤。

2.根据权利要求1所述的一种快速血管化的组织工程皮肤的构建方法，其特征在于，S1中，所述微载体为可降解合成高分子材料，如聚己内酯、聚乳酸乙醇酸共聚物、聚乙醇酸酯、聚乳酸及其共聚物，或者天然高分子材料，如胶原蛋白、弹性蛋白、胶原蛋白的水解产物明胶、丝素蛋白、甲壳素中的一种或者多种。

3.根据权利要求2所述的一种快速血管化的组织工程皮肤的构建方法，其特征在于，S1中，所述血管形成相关因子包括血管内皮生长因子、血小板衍生生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子和促血管生成素中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的一种快速血管化的组织工程皮肤的构建方法，其特征在于，S1中，动态灌注脉冲培养的参数为：流速30-60ml/min，脉冲频率25-75次/min。

5.根据权利要求4所述的一种快速血管化的组织工程皮肤的构建方法，其特征在于，S2中，成纤维细胞以0.5-5×10⁶个/ml的密度接种于水凝胶。

6.根据权利要求5所述的一种快速血管化的组织工程皮肤的构建方法，其特征在于，S2和S3中，所述水凝胶材料均为透明质酸、海藻酸钠、壳聚糖、纤维素、胶原蛋白、明胶和DNA中的一种或多种，材料形成三维网络结构，所述三维网络孔径200μm。

7.根据权利要求6所述的一种快速血管化的组织工程皮肤的构建方法，其特征在于，S2的培养容器中，微管I的密度50-200根/mm²，微球与微管I比例1：1。

8.根据权利要求7所述的一种快速血管化的组织工程皮肤的构建方法，其特征在于，S3中，脂肪干细胞以0.5-5×10⁶个/ml的密度接种于水凝胶。

9.根据权利要求8所述的一种快速血管化的组织工程皮肤的构建方法，其特征在于，S3的培养容器中，微管I和微管II数量比为5-10：1，两者密度合计50-200根/mm²，两种微管数量之和与微球数量的比例为1：1。

10.权利要求1所述方法构建的组织工程皮肤。