[发明专利]一种适于制备高效价感受态细胞的缓冲液及其应用

权利要求书

1.一种适于制备大肠杆菌高效价感受态细胞的缓冲液，其特征在于：所述缓冲液命名为TSS-HI缓冲液，其配方是：聚乙二醇8000 60g/L-140g/L、二甲基亚砜50±5mL/L、甘油80mL/L-120mL/L、氯化镁1.9g/L-4.76g/L、用胰化蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L配制的LB液体培养基补齐到1L并用盐酸调pH至6.1±0.1，121℃高压灭菌后加入无菌4M的氯化锰25.6mL/L-52.6mL/L。

2.根据权利要求1所述适于制备大肠杆菌高效价感受态细胞的缓冲液，其特征在于：所述TSS-HI缓冲液的配方是：聚乙二醇8000 100g/L、二甲基亚砜50mL/L、甘油100mL/L、氯化镁1.9g/L、用胰化蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L配制的LB液体培养基补齐到1L并用盐酸调pH至6.1，121℃高压灭菌后加入无菌4M的氯化锰36.2mL/L。

3.权利要求1或2所述的缓冲液在制备大肠杆菌高效价的感受态细胞实现DNA的高效转化中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述制备大肠杆菌高效价的感受态细胞的方法是：从固体LB平板挑取大肠杆菌单克隆至含LB液体培养基的试管中，培养12小时后转接至50mL三角瓶中使菌的初始OD₆₀₀＝0.02，继续培养待OD₆₀₀长至0.5时收菌；冰浴10min后4000rpm,10min,4℃离心；弃上淸，加入1mL TSS-HI缓冲液并在冰上轻混使菌悬浮，避免产生气泡；再4000rpm,10min,4℃离心；弃上清，加入1mL TSS-HI缓冲液在冰上轻混匀，冰浴10min后按30μL/管分装，-80℃存储；所述DNA转化的方法是：将5μL KCM液、设定量DNA和H₂O补齐至25μL，再加入25μL制得的高效价感受态细胞轻柔混匀，冰浴30min，42℃热击90s，冰上放置2min，加250μL LB液体培养基恢复培养1h后涂布相应抗性的平板；其中所述KCM液的配方是：氯化钾37.27g/L,氯化钙16.65g/L,氯化镁23.8g/L，余量为水。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述大肠杆菌是大肠杆菌BW3KD、Omnimax、XL1-Blue MFR’、Stble3、Mach1或Stbl2。