[发明专利]一种尺寸可控且可脱离基底的巨型脂质体制备方法

说明书

本发明属于脂质体技术领域，具体涉及一种尺寸可控且可脱离基底的巨型脂质体制备方法，为解决采用现有巨型脂质体制备方法制备得到的巨型脂质体尺寸均一性差且难以控制的问题，本发明通过高精度位移台和切割微针构建的薄膜微结构加工装置，可将脂质膜加工为不同尺寸的方形岛状脂质膜结构；同时，通过外加电场刺激的方式能够在单个岛状脂质膜上得到具有特定尺寸的单个巨型脂质体，所得巨型脂质体为尺寸在5‑100μm范围内，生长尺寸可控。此外，上述制备得到的巨型脂质体可以脱离基底，并转移至其它溶液中，从而得到许多尺寸均一性良好的悬浮巨型脂质体，可被转移至观察皿中进行操控加载，可用于更加多样的研究和更广的应用领域。

技术领域

本发明属于脂质体技术领域，具体涉及一种尺寸可控且可脱离基底的巨型脂质体制备方法。

背景技术

巨型脂质体是由脂质分子在水相溶液中通过疏水作用形成的由双分子层包围而成的单层密闭球形囊泡，其尺寸一般在1-100μm范围内。由于巨型脂质体具有结构和成分与天然生物膜相似，尺寸和物理性质与真实细胞相似，以及在光学显微镜下可观察和实施、操作等优点，在分子生物学、细胞生物学、药物运输、化学反应等领域都具有十分广阔的应用前景。随着科技的发展，各个领域均对巨型脂质体提出了更高的要求，包括尺寸的可控性和均一性、可脱离基底形成悬浮态等。常见的巨型脂质体制备方法主要有温和水合法、凝胶辅助水合法、电形成法等。其中，目前广泛使用的方法是电形成法，该方法是指在干燥脂质膜于水相溶液中发生自发膨胀时施加一个外加电场来刺激其生长的方法。然而，使用现有的制备方法所得到的巨型脂质体尺寸分布不均匀，直径范围在10-100μm不等，同时其尺寸难以按需要来准确控制，且凝胶辅助水合法还会向巨型脂质体中引入聚合物杂质。

近年来，随着微纳加工技术的发展，通过向巨型脂质体制备装置中引入微结构的方式是实现巨型脂质体尺寸控制的有效手段。比如有研究构建了具有微图案的电极基底，通过改变微图案的尺寸来实现巨型脂质体的尺寸调控；还有研究基于微印章法在基底上构建了微图案化脂质膜，通过调控脂质膜的尺寸来实现巨型脂质体的尺寸控制；最近，还有研究在基底上通过微纳加工的方式构建了微米量级的凹孔结构，通过微孔结构来聚集电场，并限制脂质膜的面积来实现巨型脂质体的尺寸控制。然而，上述这些方法均需要较高的工艺技术以及昂贵的设备，操作步骤复杂且成本高昂。同时，微孔结构的边缘会与膜有较强的粘附作用而导致制备得到的巨型脂质体难以脱离基底而无法形成悬浮态，使得这类方法应用范围窄。因此，开发一种简单且有效的方法来制备尺寸可控且可脱离基底的巨型脂质体具有重要的经济价值和应用前景。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提出了一种巨型脂质体的制备方法，所制得的巨型脂质体为微米量级，尺寸可控制在5-100μm范围内，且可脱离基底形成悬浮状态，同时本发明的制备方法操作简单有效，无需使用昂贵的设备，成本低廉，应用范围广阔。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种尺寸可控且可脱离基底的巨型脂质体制备方法，该方法包括以下步骤：

S1、脂质分子溶液配制：将脂质分子溶解到三氯甲烷和乙腈混合溶液中，制备得到脂质分子溶液；

S2、脂质膜制备：将步骤S1的脂质分子溶液沉积在导电基底上，经干燥后得到覆盖在基底上的脂质膜；

S3、岛状脂质膜制备：将步骤S2中覆盖了脂质膜的基底固定于高精度位移台的工作平台，通过X轴方向的单步移动参数来控制基底的横向移动距离，并用微针在Y轴方向进行切割，随后将基底旋转90°，重复上述的切割操作，将脂质膜加工为方形的岛状脂质膜；

S4、巨型脂质体制备：在步骤S3中覆盖了岛状脂质膜的基底部分贴上中空绝缘硅胶垫片，在垫片的中空部分加入水相溶液，随后盖上导电基底并使上下导电基底的导电面相对，将电场施加于上下两个导电基底之间，得到特定尺寸的巨型脂质体；

S5、巨型脂质体转移：将步骤S4中的巨型脂质体经水相溶液稀释后即可得到具有特定尺寸的悬浮态巨型脂质体。