[发明专利]一种增强细菌中外源蛋白活性和表达的前导稳定元件

权利要求书

1.一种增强细菌中外源蛋白活性和表达的前导稳定元件，其特征在于：所述前导稳定元件为沙门氏菌肠亚种肠衣原体鼠伤寒菌株RM13672(Salmonella entericasubsp.enterica serovar Typhimurium strain RM13672)SspH1基因的最小启动子和SspH1蛋白N端的208个氨基酸残基的编码序列，所述最小启动子的核苷酸序列如SEQ IDNO：3所示，所述编码序列包含可变N端区域，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述细菌为大肠杆菌，且所述编码序列与外源蛋白编码序列同框。

2.一种权利要求1所述的增强细菌中外源蛋白活性和表达的前导稳定元件的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，PCR克隆沙门氏菌肠亚种肠衣原体鼠伤寒菌株RM13672 SspH1基因的最小启动子和SspH1蛋白N端208个氨基酸残基的编码序列；

步骤2，将步骤1克隆得到的SspH1的最小启动子和其N端208个氨基酸残基的编码序列通过XhoI/NotI限制酶酶切连接到酶切位点修饰过的pGL3-Basic质粒的荧光素酶编码区上游，得到重组质粒；

步骤3，将得到的重组质粒转染到大肠杆菌E.coli C2566中，在LB肉汤培养基中培养12个小时，收获细胞并裂解，使用发光计Lumat LB9507测量细胞裂解物中的相对萤光素酶活性，从而鉴定出增强细菌中外源蛋白活性和表达的前导稳定元件。

3.根据权利要求2所述的一种增强细菌中外源蛋白活性和表达的前导稳定元件的鉴定方法，其特征在于：所述步骤1中沙门氏菌肠亚种肠衣原体鼠伤寒菌株RM13672 SspH1基因的最小启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

4.根据权利要求2所述的一种增强细菌中外源蛋白活性和表达的前导稳定元件的鉴定方法，其特征在于：所述步骤1中克隆所用的引物对序列如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示；PCR克隆的反应条件为：95℃2min；35个循环的95℃30sec，55℃30sec，72℃1min；72℃5min。