[发明专利]WTN多肽及其在检测前列腺癌中的用途

说明书

本发明提供了WTN多肽及其在检测前列腺癌中的用途，同时提供了包括WTN多肽的多肽复合物、其编码DNA分子、其所在的载体、宿主细胞和药物组合物、检测PSMA的试剂盒，所述试剂盒包括前述WTN多肽的缀合物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及WTN多肽及其在检测前列腺癌中的用途。

背景技术

恶性肿瘤是危害人类健康的主要重大疾病之一。传统肿瘤治疗方式如手术、放疗、化疗是近几十年来用于肿瘤治疗的主要策略，但是，病人会对药物及放疗治疗产生抗性，致使高频率的肿瘤患者复发。

肿瘤细胞治疗，因其特异靶向性、效果显著、几无副作用等优点而得到了极大关注，逐步成为肿瘤综合治疗中的一个重要手段，被业界称为肿瘤的绿色疗法，也是当前肿瘤治疗基础研究和临床应用的热点与发展方向。在开发基于免疫细胞的肿瘤细胞治疗中，已取得许多重要进展。在许多不同类型的肿瘤细胞治疗中，正在开发的最有前景的肿瘤细胞治疗之一为表达嵌合抗原受体的免疫细胞(CAR-T细胞、CAR-NK细胞)。

嵌合抗原受体(CAR)为经基因工程改造的受体，其经设计可以靶向特异性抗原(例如，肿瘤抗原)。这种靶向特异性可导致对肿瘤的细胞毒性，例如使得表达CAR的免疫细胞可以特异性靶向肿瘤细胞，并杀死肿瘤细胞。

嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)技术的不断发展，目前CAR-T主要可划分为三代。第一代CAR-T细胞由胞外结合区-单链抗体(single-chain fragment variable,scFV)、跨膜结构域(transmembrane region,TM)和信号转导结构域-免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif,ITAM)组成，其中嵌合抗原受体各部分按如下形式连接：scFv-TM-CD3ζ。该种CAR-T细胞可以激发抗肿瘤的细胞毒性效应，但是细胞因子分泌比较少，并且在体内不能激发持久的抗肿瘤效应。随后发展的第二代CAR-T细胞加入了CD28或CD137(又名4-1BB)的共刺激结构域，其中嵌合抗原受体各部分按如下形式连接：scFv-TM-CD28-ITAM或scFv-TM-CD137-ITAM。信号转导结构域发生的B7/CD28或4-1BBL/CD137共刺激作用引起T细胞的持续增殖，并能够提高T细胞分泌IL-2和IFN-γ等细胞因子的水平，同时提高CAR-T在体内的存活周期和抗肿瘤效果。近些年发展的第三代CAR-T细胞，其中嵌合抗原受体各部分按如下形式连接：scFv-TM-CD28-CD137-ITAM或scFv-TM-CD28-CD134-ITAM，进一步提高了CAR-T在体内的存活周期和其抗肿瘤效果。目前，CAR-NK中所用到的CAR的结构模式基本沿用的是CAR-T的设计。

本发明通过噬菌体展示技术筛选到了与肿瘤特异性结合效率更好的WTN多肽，并验证了该多肽的特异性。WTN多肽与可检测标记物结合后可用于癌症标记物PSMA的检测，WTN多肽制备成的CAR-T或CAR-NK细胞可以精准靶向表达PSMA的细胞。

发明内容

本发明提供了一种与PSMA(前列腺特异性膜抗原)特异性结合的WTN多肽及其复合物、缀合物、DNA分子、载体和宿主细胞。

本发明第一方面提供了一种与PSMA特异性结合的WTN多肽，所述WTN多肽是与SEQID NO:1所示的多肽有90％以上的同源性的多肽，具体地，所述多肽与SEQ ID NO:1有90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，100％的同源性。

优选地，所述WTN多肽在SEQ ID NO:1所示的多肽的第1位、第2位、第3位、第4位、第5位、第6位、第7位、第8位、第9位、第10位、第11位和第12位中的一个或多个位置发生取代、缺失或添加。

优选地，所述WTN多肽是SEQ ID NO:1所示的多肽。