[发明专利]KHL多肽及其在制备TABP-EIC细胞中的应用

说明书

本发明提供了KHL多肽及其在制备TABP‑EIC细胞中的应用，另外本发明还提供了KHL多肽缀合物、包含KHL多肽的肿瘤抗原结合多肽、DNA分子、载体、宿主细胞和药物组合物。所述肿瘤抗原结合多肽由KHL多肽、跨膜结构域和/信号转导结构域组成。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种KHL多肽及其在制备TABP-EIC细胞中的应用。

背景技术

肿瘤嵌合抗原受体(CAR)疗法，指的是一种新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。通常，CAR通过基因工程技术，将免疫细胞激活，并装上定位导航装置CAR，将普通的T细胞、NK细胞对应地重组为CAR-T细胞、CAR-NK细胞，CAR-T细胞、CAR-NK细胞能够利用其嵌合的CAR，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，能够高效地杀灭肿瘤细胞，从而达到治疗恶性肿瘤的目的。另外，将定位敲入CAR的免疫细胞移植回原患者身体内，可避开自身免疫系统的攻击难题。

自然杀伤(natural killer，缩写NK)细胞是非特异性免疫系统的重要组成部分，先天免疫系统反应的关键性介质细胞。NK细胞是一种广谱免疫细胞，具有快速发现和摧毁异常细胞(如癌症或病毒感染的细胞)的特异功能，而且不需要提前致敏或HLA配型，即可展示强大的溶解异常细胞的活性。但NK细胞数量较少，在外周血中仅占淋巴细胞的10％-15％，在脐带血中NK的含量更低，只有5％左右，正常人体外周血中和脐带血中NK细胞含量远远不能满足临床治疗的需要。NK细胞的数量和纯度是临床疗效的重要影响因素，NK细胞数量太少不能达到治疗的效果，纯度低则会影响对肿瘤的杀伤作用。

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，缩写CAR)修饰的免疫细胞使用遗传工程手段修饰免疫细胞使其表达外源性抗肿瘤基因。CAR基因主要包括细胞外识别域和细胞内信号转导结构域：前者用于识别肿瘤表面特异性分子，后者用于启动识别肿瘤表面分子后的免疫细胞应答，发挥细胞毒作用。

经过CAR结构修饰后的NK细胞，能够高效的识别肿瘤细胞，并通过释放杀伤介质、诱导靶细胞凋亡等多种手段杀伤肿瘤细胞。但是现有技术制备CAR-NK细胞存在制备方法操作复杂，制备的细胞活性不够、数量少的问题。

本发明通过噬菌体展示技术筛选到了与肿瘤特异性结合效率更好的KHL多肽，并验证了该多肽的特异性。KHL多肽与可检测标记物结合后可用于癌症标记物PSMA的检测，KHL多肽制备成的TABP-EIC(Tumor Antigen Binding Peptide-Engineering ImmuneCell，肿瘤抗原结合肽-工程化免疫细胞)细胞可以精准靶向表达PSMA的细胞。

发明内容

本发明提供了一种与PSMA(前列腺特异性膜抗原)特异性结合的KHL多肽及其缀合物、肿瘤抗原结合肽、DNA分子、载体和宿主细胞。

多肽

一方面，本发明提供了一种与PSMA特异性结合的KHL多肽，所述KHL多肽选自以下任一一种：

1)SEQ ID NO:1所示的多肽；

2)将SEQ ID NO:1所示的多肽经过一个或多个(2个、3个、4个、5个、6个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有PSMA特异性结合功能的多肽；

3)与SEQ ID NO:1所示的多肽有90％以上的同源性的多肽，具体地，所述多肽与SEQ ID NO:1有90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％的同源性。

优选地，所述KHL多肽是SEQ ID NO:1所示的多肽。