[发明专利]一种高效生产广藿香醇的工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种高效生产广藿香醇的工程菌，其特征在于，所述工程菌以解脂耶氏酵母菌为出发菌株，在解脂耶氏酵母菌的基因组中插入优化的广藿香醇合酶编码基因PS1和tHMGR编码基因后得到；所述优化的广藿香醇合酶编码基因PS1如SEQ ID NO.1所示；所述tHMGR编码基因如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的高效生产广藿香醇的工程菌，其特征在于，所述工程菌为重组解脂耶氏酵母菌是在解脂耶氏酵母基因组中整合经优化的广藿香醇合酶酶编码基因PS1的表达盒和tHMGR编码基因表达盒后得到。

3.根据权利要求1所述的高效生产广藿香醇的工程菌，其特征在于，所述优化的广藿香醇合酶表达盒和tHMGR表达盒通过质粒形式导入解脂耶氏酵母，然后整合到解脂耶氏酵母基因组上。

4.根据权利要求1所述的高效生产广藿香醇的工程菌，其特征在于，所述解脂耶氏酵母优选为Yarrowia lipolytica Po1fΔku70。

5.根据权利要求1所述的高效生产广藿香醇的工程菌，其特征在于，所述PS1表达盒的启动子为解脂耶氏酵母的P_TEFin启动子或P_EXP启动子；所述PS1终止子为解脂耶氏酵母的T_XPR2T终止子或者T_CYC1t终止子。

6.根据权利要求1所述的高效生产广藿香醇的工程菌，其特征在于，所述述tHMGR表达盒的启动子为解脂耶氏酵母的P_TEFin启动子、P_TEF启动子或P_EXP启动子；所述tHMGR终止子为解脂耶氏酵母的T_XPR2T终止子、T_CYC1t终止子。

7.一种权利要求1所述高效生产广藿香醇的工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)重组质粒pUC-leu-A08-PS1的构建：

重组质粒pUC-Ieu-A08-PS1是以pUC-leu为骨架，插入了Yarrowia lipolytica Polf-Δku70中A08位点处上下游同源臂，在该上下游同源臂之间插入了PS1基因表达盒；

(2)重组质粒pUC-HUH-IntC-tHMGR的构建：

重组质粒pUC-HUH-IntC-tHMGR是以pUC-his-ura-hisG为骨架，插入了Yarrowialipolytica Polf-Δku70中IntC位点处上下游同源臂，在该上下游同源臂之间插入了tHMGR表达盒；

(3)将质粒pUC-leu-A08-PS1导入Yarrowia lipolytica Polf-Δku70中得到重组菌1为生产广藿香醇的工程菌；质粒pUC-HUH-IntC-tHMGR导入重组菌1，tHMGR表达盒整合至基因组IntC位点，得到重组菌2为高产广藿香醇的工程菌。

8.一种权利要求1所述高效生产广藿香醇的工程菌在发酵生产广藿香醇的中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述发酵条件为25-30℃，180-200rpm，发酵培养基中葡萄糖浓度为50-60g/L。