[发明专利]用于治疗骨骼缺损的体干细胞

说明书

一种治疗个体内的骨骼缺损的方法，其包含施用有效量的分离的体干细胞至需要其的个体内的骨骼缺损处，其中所述体干细胞大小为大约2至8.0μm且为Lgr5+或CD349+。

本申请是申请日2015年11月18日，国际申请号PCT/US2015/061257、中国申请号201580043614.0，发明名称为“用于治疗骨骼缺损的体干细胞”的专利申请的分案申请。

相关申请案的交叉引述

本申请案主张2014年11月19日提交的美国专利临时申请案第62/081,880的优先权，其整体内容并入本文以作为参考数据。

发明领域

本发明有关于用于治疗骨骼缺损的体干细胞。

发明背景

干细胞为多潜能的或全能的干细胞，其能于活体内或活体外分化成许多的或者全部的细胞谱系。由于其多能性，胚胎干(ES)细胞保有治疗各种各样的疾病的巨大潜力。然而，道德的考虑已妨碍了人类ES细胞的用途。非胚胎起源的干细胞能规避此障碍。这些成体干细胞具有如同ES细胞一样的分化能力。

已分离源自骨髓的多潜能的成体祖细胞，其能分化成外胚层、中胚层以及内胚层。其他类型的细胞，包括骨髓分离的成体多谱系可诱导的细胞以及衍生自骨髓的单细胞克隆，也具有相同多潜能的分化能力。这些多潜能的体细胞不易获得、培养，及扩增。

发明概要

本文所描述的是一种治疗个体内的骨骼缺损的方法。该方法包括施用有效量的分离的体干细胞至需要其的个体内的骨骼缺损处。该体干细胞大小为大约2至8.0μm且为Lgr5+或CD349+。

该分离的体干细胞可以通过下列的程序来获得：于容器中以EDTA或肝素来培养源自供体个体的样本直到该样本分离成上层和下层；收集该上层；以及从该上层单离体干细胞群，其大小为大约2至8.0μm且为Lgr5+或CD349+。

以下的附图及说明中列举一个或更多个实施方案的细节。从本说明及图示，以及从权利要求将更明了该实施方案的其他特征、目的及优点。

附图简述

图1为一组影像，其展现出利用SB细胞进行的颅缺损的修复。(A)：阳性和阴性对照。(B)：SB细胞。

较佳实施例的详细说明

意外地发现小成体干细胞(small adult stem cells)，也即SB细胞，可以从来自个体的样本分离。SB细胞为多潜能的或全能的干细胞，其能分化成与三种胚胎胚层，即外胚层、内胚层及中胚层，有关联的细胞类型。参见，US2012/0034194。

从生物样本(例如，骨髓样本)分离的SB细胞大小为大约2至6.0μm，CD133-、CD34-、CD90-、CD66e-、CD31-、Lin1-、CD61-、Oct4+、Nanog+，以及Sox2-。在SB细胞群中，有一种独特的细胞亚群，其为CD9-及Lgr5+(“Lgr5+SB细胞”)。有另一种SB细胞亚群，其为CD9+及CD349+(“CD349+SB细胞”)。

SB细胞可以使用下列的程序从样本分离。该样本用EDTA或肝素于容器中(例如，于EDTA管中)培养，直到该样本分离成上层和下层。培养可以在4℃下执行历时6至48小时。由以上的培养步骤生产的上层含有SB细胞(例如，Lgr5+SB细胞及CD349+SB细胞)，其分离可以使用根据细胞大小的方法(例如，离心和过滤)，或者根据细胞表面标志的那些方法(例如，流式细胞术、抗体，以及磁分选)。

为了富集(enrich)SB细胞，可以从上层中的该细胞群移除Lin+细胞及CD61+细胞。备选地，可以从该细胞群选择Lin-细胞及CD61-细胞。Lin+及CD61+细胞可以使用本领域已知的方法予以移除或选择，例如，EasySep Biotin Selection Kit及EasySep PESelection Kit。