[发明专利]一种检测禽传染性喉气管炎病毒的试剂盒和检测方法

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体是涉及到一种检测禽传染性喉气管炎病毒的试剂盒和检测方法，包括AILTV‑反应液、DNA酶混合液、AILTV‑内标、AILTV‑阳性对照和AILTV‑阴性对照；本发明的灵敏度与特异性高，有效降低出现假阳假阴几率，并且可以“一步法”实现样品的快速可靠的检测。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体是涉及到一种检测禽传染性喉气管炎病毒的试剂盒和检测方法。

背景技术

禽传染性喉气管炎(Avian infectious laryngotracheitis，AILT)是由禽传染性喉气管炎病毒(Avian infectious laryngotracheitis virus，AILTV)感染引起的一种严重影响世界范围内家禽业的急性、高传染性病毒性疾病，发病率可高达90％～100％，死亡率5％～50％不等。该疾病最初于1925年在美国报道，兽医最初将这种疾病称为禽白喉，AILT的名称在1931年由美国兽医协会家禽疾病特别委员会采用。

AILT是一种高度传染性的鸡上呼吸道疾病，AILTV又称禽疱疹病毒I型((GaHV-1))，属于Iltovirus属，疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科。AILTV的基因组包含一个150-155kb的线性双链DNA，其编码一个独特的长序列(UL)，独特的短序列(US)和两个反向重复序列(IR)。在电镜下AILTV表现为典型的疱疹病毒粒子，病毒颗粒呈球形，为二十面立体对称，DNA核心在二十面体衣壳内，衣壳由被膜层和外包膜糖蛋白所包围。病毒衣壳的直径约为100nm，完整的病毒直径在200～350nm范围内。AILTV基因组由80个开放阅读框(OpenReading Frames,ORFs)组成。其中65个位于UL区域，9个位于US区域，6个位于IR区域。AILTV包膜糖蛋白gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gJ、gK、gL和gM分别由高度保守的ORFs UL27、UL44、US6、US8、US4、UL22、US7、US5、UL53、UL1和UL10编码。2001年，Roizman及Pellett研究揭示病毒糖蛋白对AILTV复制和诱导宿主体液及细胞免疫反应具有重要意义。2017年，Nadimpalli及其团队设计UL(-1)基因缺失的AILTV毒株，用编码绿色荧光蛋白(GFP)和巨细胞病毒主要即时启动子元件的基因代替UL(-1)，发现UL(-1)基因缺失的AILTV毒株在宿主细胞中失去复制能力，揭示UL基因在AILTV复制中发挥重要作用。同其他α疱疹病毒，AILTV基因组包含三个DNA复制起点，一个OriL位于UL区域，两个OriS位于内部重复(IR)和末端重复(TR)区域。病毒的复制与重组几乎是不可分割的，基于TaqMan SNP基因分型试验，位于AILTV UL(-1)、US5、US6、US7、US8和US9基因中的11个SNP及位于UL43和UL47基因中的两个SNP具有很高的重组率。

AILTV感染宿主后，进行基因组的复制、病毒包装、获得毒力而后致病，并建立潜在感染。AILTV可在三叉神经节中建立潜伏，当感染个体受到诸如接种疫苗、转移和产蛋等刺激时，病毒被重新激活。AILTV的复制发生在感染的第一周，结膜和气管粘膜是AILTV复制的主要部位，导致炎症、浆液或粘液排出和呼吸窘迫。由于AILTV首先与鼻腔内的细胞、结膜粘膜和哈德氏腺相互作用，因此这些组织在早期病毒复制中起着关键作用，并决定了感染的进程。除了在呼吸器官中可以检测到AILTV之外，在其他器官，如大脑、舌头、扁桃体、胸腺、心脏、前囊、胰腺、十二指肠、小肠、大肠、盲肠、肝、脾和肾中也可检测到AILTV。AILTV感染过程中病毒DNA进行复制，在宿主细胞中病毒DNA逐渐积累，随后这些DNA被整合到位于宿主细胞核内新形成的病毒颗粒中，导致嗜碱性核内包涵体的形成，在感染后12小时左右可检测到。