[发明专利]一种四倍体川桑组培快繁的方法

说明书

本发明提供了一种四倍体川桑组培快繁的方法。首先通过刚好能够支撑组培幼苗的、硬度小的继代培养基，克服了前期基部愈伤生长旺盛导致的植株矮小和叶片发黄的现象，获得顶芽生长旺盛、叶片绿色健康的幼苗。再用添加细胞分裂素的生根培养基进行诱导生根，成功通过组培的方法获得四倍体川桑完整植株，生根率可达78.67％，并且通过驯化移栽至室外。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种四倍体川桑组培快繁的方法。

背景技术

川桑(2n＝2x＝14)是首个测序的桑树品种，因其取材困难，嫁接和移栽存活率极低，因此，在组培条件建立一套快繁体系，为材料的保存和扩繁提供可能。

前期有学者对川桑的组培快繁做了探索，王茜龄等(单倍体川桑(M.notablisSchneid)愈伤组织诱导及丛生芽分化培养)用含芽茎段诱导丛生芽，得到了丛生芽，但未对其后期扩繁长势进行描述，并且，该文指出川桑生根困难，未得到组培条件下川桑的生根。此文用到的丛生芽诱导培养基为改良MS+6-BA2.0 mg/L+IAA 0.02mg/L+TDZ 0.1mg/L+AgNO3 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L。生长素是组织培养生根常用的植物激素。王茜龄等用到的生根培养基同样是仅添加生长素的培养基，但最终并没有成功诱导出川桑的根。

研究发现，在组培条件下对川桑进行加倍，其抗性和适应性有所增加，但总体长势还是较弱，表现为组培苗基部愈伤生长旺盛，植株矮小，叶片发黄(人工诱导野生桑种质资源染色体的加倍；蒙桑种质资源多倍体诱导及四倍体川桑抗性的初步评价)。因此，急需探索出新的川桑培育方法，提高川桑培育效率。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种组培扩繁四倍体川桑的方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种四倍体川桑组培快繁的方法，所述方法为，

A：取四倍体川桑幼苗，保留1-2个腋芽以及顶芽，插入继代培养基中，2000lx光照，每天16小时，26±2℃培育4-6周，得到四倍体川桑幼苗；

B：取四倍体川桑幼苗，切掉基部愈伤组织，保留木质化部分，插入生根培养基中，培养35-56天，当有2-3片深绿色新叶长出时，向培养基中加水浸泡8-12h，取出组培苗移入装有营养土和蛭石的盆中培养；

所述继代培养基包括MS培养基、0.5-1mg/L 6-BA、30g/L蔗糖和5-8g/L琼脂，pH为5.5-8；

所述生根培养基包括MS培养基，0.5-1mg/L 6-BA、30g/L蔗糖、0.25g/L活性炭和5-8g/L琼脂，pH为5.5-8。

作为优选的技术特征之一，所述MS培养基为MS524或者MS535培养基。

作为优选的技术特征之一，所述营养土和蛭石的体积比为4:1。

本发明的有益效果在于：

本发明提供了一种四倍体川桑组培快繁的方法。首先通过刚好能够支撑组培幼苗的、硬度小的继代培养基，克服了前期基部愈伤生长旺盛导致的植株矮小和叶片发黄的现象，获得顶芽生长旺盛、叶片绿色健康的幼苗。再用添加细胞分裂素的生根培养基进行诱导生根，成功通过组培的方法获得四倍体川桑完整植株，生根率可达78.67％，并且通过驯化移栽至室外。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作优选的详细描述，其中：