[发明专利]大豆主茎节数关联的InDel分子标记的引物和应用有效
申请号: | 202110803595.4 | 申请日: | 2021-07-16 |
公开(公告)号: | CN113308566B | 公开(公告)日: | 2023-04-25 |
发明(设计)人: | 杨玉花;张瑞军;白志元;雷阳 | 申请(专利权)人: | 山西农业大学 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/04 |
代理公司: | 深圳市千纳专利代理有限公司 44218 | 代理人: | 严宏伟 |
地址: | 030031 山*** | 国省代码: | 山西;14 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 大豆 主茎节数 关联 indel 分子 标记 引物 应用 | ||
1.大豆主茎节数关联的InDel分子标记的引物对,含有所述引物对的试剂和/或试剂盒在鉴定大豆主茎节数中的应用;
其中,所述大豆主茎节数关联的InDel分子标记包括Chr04-38和Chr04-46;
扩增Chr04-38的引物对包括:上游引物序列SEQ ID NO.1:CCTTGCATGCACAAAATCAC,下游引物序列SEQ ID NO.2:TCATGCACTACCGTTTCAGG;
扩增Chr04-46的引物对包括:上游引物序列SEQ ID NO.3:CGATCAGAGCACAATAGCCA,下游引物序列SEQ ID NO.4:GACACCTGAGCACCAAGGAT。
2.一种鉴定大豆主茎节数的方法,其特征在于,通过基因工程技术,采用权利要求1中所述的引物对鉴定大豆主茎节数。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(a)引物设计:设计并筛选,得到权利要求1中所述的引物对;
(b)DNA提取:提取待检测大豆植株总DNA;
(c)PCR扩增:以步骤(b)获得的总DNA为模板,采用步骤(a)的引物对进行PCR扩增,获得PCR产物;
(d)电泳图谱分析:对所得PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、显影、染色和带型判读,根据其大小及位置关系确定所属基因型。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述步骤(c)中,引物对中的正向引物和反向引物的浓度均不小于10μmol/L。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述步骤(c)中,PCR反应体系:100ng/μl大豆总DNA1μl、正向引物1μl、反向引物1μl、2×Power Taq PCR MasterMix 12.5μl、ddH2O9.5μl。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述PCR的反应程序:94℃ 5分钟,35个循环的94℃ 20秒钟、58℃ 1分钟、72℃ 30秒,72℃ 5分钟。
7.权利要求2-6任一项所述的鉴定大豆主茎节数的方法在大豆主茎节数辅助选择育种中的应用。
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