[发明专利]一种同时检测谷物中AFB1和Cd的双联荧光免疫定量试纸条

权利要求书

1.一种制备同时检测AFB1和Cd的双联荧光免疫定量试纸条的方法，其特征在于，包括如下步骤：

将0.01-1.0mg/mL AFB1完全抗原溶液涂到硝酸纤维素膜上作为检测线T1，将0.1-1.0mg/mLCd完全抗原溶液涂到硝酸纤维素膜上作为检测线T2，将0.05-1mg/mL羊抗鼠二抗溶液涂到硝酸纤维素膜上作为质控线C，其中检测线T1和检测线T2之间的距离为3-5mm，检测线T1和质控线C的距离为3-5mm，检测线T2和质控线C在检测线T1的两边，干燥；之后将样品垫、含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC底板上组装成试纸条。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述双联荧光免疫定量试纸条中，样品垫和含有检测线、质控线的硝酸纤维素膜的一端部分相互重叠，重叠区域的长度为2-4mm；吸水纸和含有检测线、质控线的硝酸纤维素膜的另一端部分相互重叠，重叠区域的长度为2-4mm；所述吸水纸、样品垫与含有检测线、质控线的硝酸纤维素膜相互重叠的部分位于含有检测线、质控线的硝酸纤维素膜的上方。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，检测线T2距样品垫的距离为4-6mm，质控线C距吸水纸的距离为4-6mm；所述的检测线T1、检测线T2和质控线C的宽度为1.5-2.5mm。

4.权利要求1-3任一项所述的方法制备得到的同时检测AFB1和Cd的双联荧光免疫定量试纸条。

5.一种同时检测谷物中AFB1和重金属Cd的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)提取谷物中AFB1和重金属Cd，得到待测溶液；

(2)将待测溶液、PBS缓冲液、经Eu³⁺-荧光微球标记的AFB1的单克隆抗、Eu³⁺-荧光微球标记的Cd的单克隆抗体混合均匀，得到预处理之后的待测溶液；

(3)将预处理的待测溶液加入权利要求4所述的双联荧光免疫定量试纸条的样品垫上进行层析，之后利用免疫定量分析仪测定样品在检测线C和质控线T1、质控线T2处相应的荧光强度值C值、AFB1的T₁值、Cd的T₂值；

(4)将得到的C值、T₁值、T₂值代入AFB1和Cd的标准曲线，得到待测样品中AFB1和Cd的浓度。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述待测溶液、Eu³⁺-荧光微球标记的AFB1的单克隆抗体、Eu³⁺-荧光微球标记的Cd的单克隆抗体和PBS缓冲液的体积比为5：3-5：5-10：85-95。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述提取具体包括如下步骤：

将谷物粉碎过筛，得到粉碎后的谷物；按照甲醇和硝酸溶液体积比为85：15，配制得到提取液；之后在粉碎后的谷物中添加提取液进行提取、离心，得到含有Cd和黄曲霉毒素B1的溶液；其中过筛是过80目筛，硝酸溶液的浓度为1.2mol/L，粉碎后的谷物和提取液的比例以mL/g计为3：1，提取是在25℃下超声提取25min，离心是在4000rpm离心5min。

8.根据权利要求5-7任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述预处理的待测溶液的用量为30-50μL/cm²。

9.权利要求4所述的双联荧光免疫定量试纸条在食品检测领域的应用。

10.权利要求5-8任一项所述的方法在食品检测领域的应用。