[发明专利]基于双金属纳米团簇比色-荧光双信号免疫层析试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种基于双金属纳米团簇比色-荧光双信号免疫层析试纸条在检测食品三氯杀螨醇中的应用；

所述基于双金属纳米团簇比色-荧光双信号免疫层析试纸条的制备方法包括如下步骤：

（1）、制备金-银双金属纳米团簇作为荧光信号分子；

（2）、制备聚乙烯亚胺改性金纳米粒子；

（3）、利用所述金-银双金属纳米团簇、所述聚乙烯亚胺改性金纳米粒子与三氯杀螨醇单克隆抗体进行络合，得到荧光纳米探针，然后喷涂在预处理的玻璃纤维膜上，干燥得到荧光探针结合垫；

（4）、利用三氯杀螨醇-卵清蛋白偶联物制备检测线T线，利用羊抗鼠二抗制备质控线C线，喷涂，组装，得到基于双金属纳米团簇比色-荧光双信号免疫层析试纸条；

步骤（1）中，所述金-银双金属纳米团簇的制备方法包括：

将氯金酸溶液和硝酸银溶液混合，然后加入5-6mL、6mmol/L还原型谷胱甘肽溶液得到混合液，搅拌反应，反应结束后冷却至室温，经透析并收集产物，存放在4℃的避光环境中；

所述搅拌反应的温度为70℃，搅拌的速率为150-200rpm，搅拌反应的时间为24h；

步骤（2）中，所述聚乙烯亚胺改性金纳米粒子的制备方法包括：

将氯金酸溶液在255℃下加热搅拌至沸腾，然后滴加1.5-2mL、1%（w/v）柠檬酸钠水溶液，持续加热搅拌10min，停止加热，搅拌冷却至室温，得到金纳米粒子溶胶；将所述金纳米粒子溶胶加入聚乙烯亚胺溶液中，超声，离心，除去上清液，洗涤，再次离心浓缩，存放在4℃避光环境中；

步骤（3）中，所述荧光探针结合垫的制备方法包括：

将所述聚乙烯亚胺改性金纳米粒子加入所述金-银双金属纳米团簇中混合后，静置，离心并浓缩，然后加入羊抗鼠二抗混合后，静置，反应结束后加入封闭液，混合后静置，再次离心并浓缩，最后加入三氯杀螨醇单克隆抗体，混合后静置，得到荧光纳米探针；将所述荧光纳米探针喷涂在预处理的玻璃纤维膜上，干燥得到荧光探针结合垫。

2.一种基于双金属纳米团簇比色-荧光双信号免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：

（1）、制备金-银双金属纳米团簇作为荧光信号分子；

（2）、制备聚乙烯亚胺改性金纳米粒子；

（3）、利用所述金-银双金属纳米团簇、所述聚乙烯亚胺改性金纳米粒子与三氯杀螨醇单克隆抗体进行络合，得到荧光纳米探针，然后喷涂在预处理的玻璃纤维膜上，干燥得到荧光探针结合垫；

（4）、利用三氯杀螨醇-卵清蛋白偶联物制备检测线T线，利用羊抗鼠二抗制备质控线C线，喷涂，组装，得到基于双金属纳米团簇比色-荧光双信号免疫层析试纸条；

步骤（1）中，所述金-银双金属纳米团簇的制备方法包括：

将氯金酸溶液和硝酸银溶液混合，然后加入5-6mL、6mmol/L还原型谷胱甘肽溶液得到混合液，搅拌反应，反应结束后冷却至室温，经透析并收集产物，存放在4℃的避光环境中；

所述搅拌反应的温度为70℃，搅拌的速率为150-200rpm，搅拌反应的时间为24h；

步骤（2）中，所述聚乙烯亚胺改性金纳米粒子的制备方法包括：

将氯金酸溶液在255℃下加热搅拌至沸腾，然后滴加1.5-2mL、1%（w/v）柠檬酸钠水溶液，持续加热搅拌10min，停止加热，搅拌冷却至室温，得到金纳米粒子溶胶；将所述金纳米粒子溶胶加入聚乙烯亚胺溶液中，超声，离心，除去上清液，洗涤，再次离心浓缩，存放在4℃避光环境中；

步骤（3）中，所述荧光探针结合垫的制备方法包括：

将所述聚乙烯亚胺改性金纳米粒子加入所述金-银双金属纳米团簇中混合后，静置，离心并浓缩，然后加入羊抗鼠二抗混合后，静置，反应结束后加入封闭液，混合后静置，再次离心并浓缩，最后加入三氯杀螨醇单克隆抗体，混合后静置，得到荧光纳米探针；将所述荧光纳米探针喷涂在预处理的玻璃纤维膜上，干燥得到荧光探针结合垫。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述金-银双金属纳米团簇的粒径为1.5-2.5nm。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述超声反应的频率为80-100kHz。