[发明专利]基于宏病毒组学的土壤病毒检测技术

权利要求书

1.一种基于宏病毒组学的土壤病毒检测方法，其特征在于，使用特定的标签引物组合物进行扩增；所述的标签引物包括引物部分和标签部分；所述的标签部分选自SEQ IDNO.1-12；所述的引物部分选自SEQ ID NO.13-14。

2.根据权利要求1所述的土壤病毒检测方法，其特征在于，所述的土壤病毒的检测方法包括以下步骤：

(1)土壤样品的前处理；

(2)切向流过滤系统过滤；

(3)超滤柱浓缩后再经无菌过滤器过滤；

(4)游离胞外DNA的去除；

(5)病毒DNA的提取；

(6)利用权利要求1所述的标签引物组合物进行扩增；

(7)电泳检测；

(8)上机检测。

3.根据权利要求1所述的土壤病毒检测方法，其特征在于，所述的引物部分为正向引物，序列为SEQ ID NO.13，标签部分选自SEQ ID NO.1-6；所述的引物部分为反向引物，序列为SEQ ID NO.14，标签部分选自SEQ ID NO.7-12。

4.根据权利要求2所述的土壤病毒检测方法，其特征在于，所述的土壤样品的前处理方法为：土壤样品过筛后按比例与柠檬酸钾混合均匀后振荡，离心。

5.根据权利要求2所述的土壤病毒检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)中的过滤条件为连续过滤，依次通过1mm，0.45μm和0.22μm的滤柱；所述的步骤(3)中超滤柱为30kDa的超滤柱，无菌过滤器规格为0.22μm。

6.根据权利要求4所述的土壤病毒检测方法，其特征在于，所述的柠檬酸钾的浓度为1％，浓度为重量体积比；所述的土壤样品与柠檬酸钾的比例为1kg/6.6L。

7.一种标签引物组合物，其特征在于，所述的标签引物包括引物部分和标签部分；所述的标签部分选自SEQ ID NO.1-12；所述的引物部分选自SEQ ID NO.13-14。

8.权利要求7所述的标签引物组合物在制备用于土壤中病毒检测的试剂盒中的应用。

9.一种基于宏病毒组学的土壤病毒检测试剂盒，其特征在于，所述的土壤病毒检测试剂盒中包括权利要求7所述的标签引物组合物。