[发明专利]EGFR基因突变检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，包括：

用于检测EGFR基因突变位点所需的EGFR特异性引物、EGFR基因突变位点探针；内控基因引物和内控基因探针；

所述EGFR特异性引物，用于扩增待测血浆样本中的目标区域以得到第一扩增产物；

所述EGFR基因突变位点探针，用于在所述第一扩增产物生成过程中进行水解反应，释放第一荧光信号；

所述EGFR特异性引物及所述EGFR基因突变位点探针分别对所述EGFR基因突变位点类型进行检测；

所述内控基因引物，用于扩增所述待测血浆样本中的管家基因以得到第二扩增产物；

所述内控基因探针，用于在所述第二扩增产物生成过程中进行水解反应，释放第二荧光信号。

2.根据权利要求1所述的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述EGFR特异性引物包括：

EGFR基因19Del位点引物，用于与所述目标区域的19Del突变位点相结合；

EGFR基因T790M位点引物，用于与所述目标区域的T790M突变位点相结合；

EGFR基因L858R位点引物，用于与所述目标区域的L858R突变位点相结合。

3.根据权利要求2所述的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述EGFR基因19Del位点引物包括第一上游引物、第一下游引物和第一封闭引物；其中，第一上游引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6，第一下游引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:7，第一封闭引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:18；

所述EGFR基因T790M位点引物包括第二上游引物、第二下游引物和第二封闭引物；其中，第二上游引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:8，第二下游引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:9，第二封闭引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:19；及

所述EGFR基因L858R位点引物包括第三上游引物、第三下游引物和第三封闭引物；其中，第三上游引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:10，第三下游引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:11，第三封闭引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:20。

4.根据权利要求3所述的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述SEQ ID NO:18、所述SEQ ID NO:19和所述SEQ ID NO:20对应的核苷酸序列的3’端分别标记有ZNA修饰。

5.根据权利要求1所述的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述EGFR基因突变位点探针包括：

EGFR基因19Del位点探针、EGFR基因T790M位点探针以及EGFR基因L858R位点探针。

6.根据权利要求5所述的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述EGFR基因19Del位点探针对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:14；所述EGFR基因T790M位点探针对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:15；所述EGFR基因L858R位点探针对应的核苷酸序列包括SEQ IDNO:16；其中，所述SEQ ID NO:14、所述SEQ ID NO:15和所述SEQ ID NO:16分别对应的核苷酸序列的5’端标记有FAM、3’端标记有Eclipse以及3’端的ZNA修饰。

7.根据权利要求1所述的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，

所述内控基因引物包括内控上游引物和内控下游引物，其中，所述内控上游引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:12，所述内控下游引物对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:13；

所述内控基因探针对应的核苷酸序列包括SEQ ID NO:17，其中，所述SEQ ID NO:17对应的核苷酸序列的5’端标记有CY5、3’端标记有Eclipse以及3’端的ZNA修饰。