[发明专利]一种基于间接胶体金法的新型冠状病毒中和抗体的检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 202110810069.0 | 申请日： | 2021-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN113588941A | 公开（公告）日： | 2021-11-02 |
| 发明（设计）人： | 范春雷 | 申请（专利权）人： | 杭州迈尔德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/559 | 分类号： | G01N33/559;G01N33/543;G01N33/569;G01N21/78 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 朱莹莹 |
| 地址： | 311800 浙江省杭州市滨江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 间接 胶体 新型 冠状病毒 中和 抗体 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种基于间接胶体金法的新型冠状病毒中和抗体检测方法，其特征在于：所述方法通过间接胶体金法，所述间接胶体金法是将羊抗小鼠IgG Fc段抗体标记于胶体金，从而可以与带小鼠IgG Fc段标签的ACE2融合蛋白结合，避免ACE2蛋白直接胶体金标记导致其新型冠状病毒棘突蛋白RBD结合域的封闭失活。
2.一种基于间接胶体金法的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，包括胶体金结合垫，其特征在于：将羊抗小鼠IgG Fc段抗体标记于胶体金并与带小鼠IgG Fc段标签的ACE2融合蛋白混匀后共同喷涂在胶体金结合垫上，使ACE2融合蛋白通过mFc标签间接偶联在胶体金上。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：包括胶体金标记羊抗小鼠IgG Fc段抗体、带小鼠IgG Fc段标签的重组人ACE2蛋白，胶体金标记的兔IgG、新型冠状病毒棘突蛋白、羊抗兔IgG多抗。
4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括免疫层析试纸条，免疫层析试纸条包括底衬、硝酸纤维素膜、样品垫、结合垫和吸水纸；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸搭接组装在底衬上，结合垫和吸水纸分别叠压在硝酸纤维素膜的两端，并在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，样品垫叠压在结合垫上；检测区的硝酸纤维素膜上设置靠近结合垫的一条检测线区(T线)和靠近吸水纸的一条控制线区(C线)。
5.权利要求2-4任一所述的试剂盒在用于检测新型冠状病毒中和抗体的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，用于新冠肺炎患者康复后和疫苗接种者血清保护抗体的评估。
7.权利要求4所述的试剂盒的制备方法，其特征在于：将羊抗小鼠IgG Fc段抗体标记于胶体金并与带小鼠IgG Fc段标签的ACE2融合蛋白混匀后共同喷涂在胶体金结合垫上；在硝酸纤维素膜上T、C线区分别包被新型冠状病毒棘突蛋白S1或RBD蛋白、和羊抗兔IgG多抗，获得血清和血浆新型冠状病毒棘突蛋白中和抗体检测试纸条。
8.权利要求4所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述血清和血浆新型冠状病毒棘突蛋白中和抗体检测试纸条，配合色卡进行肉眼定性判断，或者采用胶体金分析仪定量分析；提供中和抗体的阴/阳性、抑制率等指标；
其中，中和抗体的抑制率根据公式1来计算；检测样本中SARS-CoV-2中和抗体的阴/阳性判断可根据抑制率来设定，具体检测限可在10％-100％的抑制率范围内设定；
公式1:
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