[发明专利]一种检测食管癌标志物P16抗原表位氨基酸序列及应用

说明书

本发明涉及一种检测食管癌标志物P16抗原表位氨基酸序列及应用，属于免疫学技术领域。本发明提供了一种肿瘤抑癌基因P16的抗原氨基酸序列，应用P16多肽抗原检测食管癌患者血中相应的特异性抗原表位，这种抗原表位可作为肿瘤标志物评估食管癌发生的危险度，这种抗原多肽及其抗体可用于制备食管癌早期诊断试剂。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，是一种用于制备食管癌早期诊断试剂。

背景技术

大量研究表明，血清或血浆中的肿瘤相关抗原能诱导机体产生抗原表位,在肿瘤患者血清中既存在肿瘤抗原,也存在针对该肿瘤抗原的抗原表位。因此，既可以利用抗体检测肿瘤抗原,也可以利用抗原检测肿瘤抗原表位，但利用肿瘤抗原表位检测肿瘤的特异性和敏感性均比利用肿瘤抗原检测肿瘤要高得多。很多肿瘤相关抗原不仅在肿瘤患者体内存在，在正常人体内也存在，因此检测肿瘤相关抗原作为诊断依据可信性差。而抗原表位在正常人体内含量很低检测不到或根本不存在，若体内抗原表位水平明显增高，则表明体内存在异常免疫情况，表明体内相关抗原水平发生波动，预示疾病的存在或原有疾病加重。

近年来的研究表明，在恶性肿瘤体积发展到可用现代影像学技术检出之前3-5年，患者血中可出现高浓度的肿瘤相关抗原抗原表位。因此，检测血中肿瘤相关抗原抗原表位具有预测肿瘤发病风险和早期诊断肿瘤的重要价值，是肿瘤临床诊断领域的重点发展方向之一。在国外已有诊断肺癌和乳腺癌的早期诊断试剂盒市售。然而，目前所报道的抗体检测方法敏感度低，特异性差，假阴性比率可高达50％以上，其主要原因是由于每一种肿瘤相关抗原抗原表位在患者中的阳性检测率平均在10％左右，如何提高诊断试剂敏感度是当前需要亟待解决的关键问题。比较行之有效的方法是寻找新的可充当肿瘤标志物的抗原表位，然后与现有已知的抗原表位组合成具有敏感度高和特异性强的诊断试剂盒。

多重肿瘤抑制基因p16，又名p35，位于人类9号染色体的短臂(9p21)，编码分子量为16KD的蛋白—P16，此蛋白位于细胞浆和细胞核内。除脑、骨骼和肌肉外，广泛地表达于各种组织器官。在功能上，P16对细胞周期起负性调节作用，可以抑制细胞周期关键酶-CDK4和CDK6，阻止细胞从G1期进入S期。肿瘤患者常合并P16基因的突变、异常或缺失，从而影响P16蛋白的功能，P16表达异常会直接导致细胞恶性增殖。当患者接受化疗、放疗后，肿瘤细胞死亡会释放出大量的P16蛋白的碎片，诱导免疫系统产生抗原表位。在国内关于胃腺癌、卵巢浆液性囊腺癌及子宫内膜癌的研究中发现，癌组织中P16基因表达呈上升趋势，但到了癌症中、晚期其表达率反而低于癌症早期，这提示P16可能成为区分病变的良恶性和病情严重性以及预后判断的有效指标。

发明内容

本发明提供一种检测食管癌标志物P16抗原表位氨基酸序列及应用，通过自行设计的P16的抗原表位多肽，检测食管癌患者血清及血浆中抗原表位水平并开发相应的试剂，预测肿瘤发生的危险性，并为肿瘤新药研究提供可靠的数据。。

本发明采取的技术方案是：提供一种检测食管癌标志物P16抗原表位的氨基酸序列为SEQ ID No.1：N-SDTAVNIDNFLSRYAEQHRNELQMQLTA-C。

其纯度95％，pH7.0。

本发明所述的P16抗原多肽在制备食管癌早期诊断试剂盒中的应用。

本发明利用自行设计的P16蛋白的线性多肽，采用ELISA法检测食管癌患者血清及血浆中抗P16蛋白的特异性自身IgG抗体，该反应具有高特异性和高灵敏性。自身IgG抗体水平升高表明肿瘤患者体内P16蛋白的表达量增加，预示患者可能出现原发性或继发性肿瘤，可以预测肿瘤发生与复发的危险性，指导临床医生对肿瘤的早期诊断，P16抗原多肽可用于制备肿瘤早期诊断试剂盒。

附图说明

图1是P16抗原多肽与血浆IgG结合的SBI曲线图；

图2是P16抗原多肽检测食管癌的ROC曲线图。

具体实施方式