[发明专利]一种基于13

权利要求书

1.一种基于¹³C代谢全位标记脂质作为内标结合同位素稀释质谱法的全脂质定量方法，其特征在于利用¹³C全标记底物作为唯一碳源加入到生物系统中，通过生物代谢过程制备¹³C标记脂质；然后将所述¹³C标记脂质作为内标，结合同位素稀释质谱法对实际生物样本中脂质进行一对一的定量分析。

2.一种基于¹³C代谢全位标记脂质结合同位素稀释质谱法的全脂质定量方法，其特征在于包括如下步骤：

1）将¹³C全标记底物作为唯一碳源加入生物培养基或膳食中通过生物代谢制备¹³C全位标记脂质，并提取¹³C全位标记脂质；同时以含¹²C碳源的普通培养基或膳食培养生物制备¹²C脂质，并提取¹²C脂质；所述¹²C碳源与¹³C全标记底物为同一物质，区别仅在于未进行¹³C标记；

2）利用超高效液相色谱串联质谱对步骤1）所提取的¹²C脂质、¹³C全位标记脂质进行脂质组学数据采集；

3）利用数据库谱图匹配和同位素理论偏差对¹²C脂质和¹³C全位标记脂质定性分析和¹³C标记效率计算；

4）对实际待测样本中脂质进行提取，按照步骤2）和3）进行数据采集和脂质定性分析，获得实际样本中脂质的种类信息；

5）以待分析实际样本和¹³C标记脂质中都存在的脂质的标准品（该脂质标准品中的C元素为¹²C，后续称之为¹²C脂质标准品）配置成不同浓度的梯度标准溶液，以¹³C全位标记脂质作为内标等量加入梯度标准溶液中，建立以¹²C脂质标准品的浓度为横坐标，以¹²C脂质标准品与相应¹³C全位标记脂质的提取离子色谱峰面积之比为纵坐标的每一类脂质的同位素稀释质谱校准曲线；

6）在对实际样本中脂质定量分析时，加入与步骤4）中等量的¹³C全位标记脂质作为内标，将目标脂质与对应¹³C全位标记脂质内标的峰面积比代入其同位素稀释质谱校准曲线，从而获得实际样本中目标脂质的绝对含量。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于¹³C代谢全位标记脂质结合同位素稀释质谱法的全脂质定量方法，其特征在于利用¹³C全标记底物作为唯一碳源培养生物系统包括微生物、细胞、植物和动物，通过生物自身摄入所述¹³C全标记底物代谢从而替换原有C元素，实现生物系统中所有脂质的¹³C标记。

4.根据权利要求1或2所述的一种基于¹³C代谢全位标记脂质结合同位素稀释质谱法的全脂质定量方法，其特征在于所述¹³C全标记底物包括CO₂，葡萄糖或碳酸盐；脂质包括甘油酯、磷脂、鞘脂、糖脂、脂肪酸、固醇脂和各类脂质代谢中间产物。

5.根据权利要求2所述的一种基于¹³C代谢全位标记脂质结合同位素稀释质谱法的全脂质定量方法，其特征在于步骤3）中，¹²C脂质定性分析时所使用数据库为MS-DIAL内置脂质数据库，一级及二级质谱离子质荷比（m/z）的精密度设置为±0.01和±0.05 Da，同时二级谱图匹配打分阈值设置为70-90%；

并且，定性分析的结果从一级质谱分子离子m/z准确度、保留时间和同位素模式三个维度进行进一步筛选；其中，m/z准确度的筛选标准为误差5 ppm，保留时间的筛选标准为误差5%，同位素模式的筛选标准为差异10%。