[发明专利]假重组嵌合黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统及其应用

权利要求书

1.一种黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统，其特征在于，包括：pCMVF1载体、pCMVZ2_2bN81载体和pCMVFZ3载体；或者pCMVF1载体、pCMVZ2_2bN81-LIC载体和pCMVFZ3载体；

所述pCMVF1载体具有SEQIDNO：1所示的核苷酸序列；

所述pCMVZ2_2bN81载体具有如SEQIDNO：4所示的核苷酸序列；

所述pCMVZ2_2bN81-LIC载体具有如SEQIDNO：5所示的核苷酸序列；

所述pCMVFZ3载体具有SEQIDNO：3所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统，其特征在于，所述pCMVF1载体、pCMVZ2_2bN81载体和pCMVFZ3载体中的病毒序列来源于不同的黄瓜花叶病毒株系；或者pCMVF1载体、pCMVZ2_2bN81-LIC载体和pCMVFZ3载体中的病毒序列来源于不同的黄瓜花叶病毒株系。

3.根据权利要求1所述的黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统，其特征在于，所述黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统是通过假重组和构建嵌合体的方式所获得。

4.根据权利要求1所述的黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统，其特征在于，所述pCMVFZ3载体是通过将pCMVF3载体中的至少部分序列和pCMVZ3载体中的至少部分序列进行嵌合所获得的。

5.根据权利要求1所述的黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统，其特征在于，进一步包括外源基因，所述外源基因通过酶切连接的方法插入到pCMVZ2_2bN81载体中，或通过不依赖于连接反应的克隆方法插入到pCMVZ2_2bN81-LIC载体中。

6.一种宿主菌组合物，其特征在于，包括：

第一宿主菌，所述第一宿主菌含有权利要求1-3任一项所述黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统中的pCMVF1载体；

第二宿主菌，所述第二宿主菌含有权利要求1-3和5任一项所述黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统中的pCMVZ2_2bN81载体或pCMVZ2_2bN81-LIC载体；

第三宿主菌，所述第三宿主菌含有权利要求1-4任一项所述黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统中的pCMVFZ3载体。

7.根据权利要求6所述的宿主菌组合物，其特征在于，所述第一宿主菌、第二宿主菌或第三宿主菌选自农杆菌或大肠杆菌。

8.一种试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1-5任一项所述黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统或者权利要求6或7所述宿主菌组合物。

9.权利要求1-5任一项所述黄瓜花叶病毒介导的基因沉默系统、权利要求6或7所述宿主菌组合物、权利要求8所述试剂盒在沉默植物中目的基因中的应用。

10.一种沉默植物中目的基因的方法，其特征在于，包括：

通过农杆菌介导的方法，将含有植物目的基因序列的权利要求6或7所述宿主菌组合物侵染植物，以便沉默所述植物中的目的基因表达；

所述植物选自双子叶植物或者单子叶植物。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述植物选自单子叶植物，将所述宿主菌组合物侵染植物之前，先将所述宿主菌组合物侵染双子叶植物，再将所得侵染后的双子叶植物对所述单子叶植物进行摩擦接种。