[发明专利]间质干细胞培养物及其制备方法

说明书

本发明公开一种间质干细胞培养物及其制备方法。间质干细胞培养物的制备方法包括：将预定数量的间质干细胞种于含有第一培养基质的平面培养装置中；当间质干细胞增殖到目标数量时，将第一培养基质替换为第二培养基质，并在培养18至30小时之后移除第二培养基质；加入目标培养基质并培养48至72小时；重复收集目标培养基质；以及过滤及浓缩目标培养基质，得到间质干细胞培养物。

技术领域

本发明涉及一种细胞培养物，特别是涉及一种间质干细胞培养物及其制备方法。

背景技术

干细胞(stem cell)是具有分化能力与自我增生能力的未分化细胞，已被现代社会广泛研究用于再生医学中。其中，属于成体干细胞(adult stem cell)的间质干细胞(mesenchymal stem cell)为近年来被广泛研究的干细胞之一，其可以从人体中各组织分离出来(例如：脂肪、牙齿、脐带、毛囊等)，并应用于修复受伤组织、抗发炎、移植医学等。近年研究发现，由干细胞所分泌的蛋白质亦具有修复细胞功能的效果，因此，如何大量萃取出干细胞培养产物为本领域的一大发展方向。

干细胞培养可以分为二维培养与三维培养。传统二维培养的方式是让细胞贴附生长，因此可以直接吸取培养液，细胞活性也较为稳定，然而传统培养皿的培养液容量有限，并无法大量生产。三维培养系让细胞附着于载体上，并以悬浮方式培养，相较于二维培养具有更广的培养面积，可一次性收取大量的培养液。然而，三维培养会因为微载体的材质不同而影响细胞的附着效果，且三维培养需以旋转瓶或叶扇型发酵槽作为培养容器，在培养液旋转时会产生剪力，造成细胞压力或细胞损伤。在收取培养液时，也需要进一步将细胞先离心下来才能收取培养液。因此三维培养的仪器成本昂贵且人力作业时程漫长，产品质量也容易因细胞状况不佳而不稳定。

故，如何通过制备方式的改良以克服上述的缺陷，并提升干细胞培养产物的收取产量与稳定质量，已成为该项事业所欲解决的重要课题之一。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，针对现有技术的不足提供一种间质干细胞培养物及其制备方法，其可以获得稳定的产量与产品质量，且可以重复收取培养基质，达到有效利用。

为了解决上述的技术问题，本发明所采用的其中一技术方案是提供一种间质干细胞培养物的制备方法，其可包括至少下列步骤。步骤(a)，将一预定数量的间质干细胞种于含有一第一培养基质的一平面培养装置中，以进行细胞增殖。步骤(b)，当所述间质干细胞增殖到一目标数量时，将所述第一培养基质替换为一第二培养基质，并在培养18至30小时之后移除所述第二培养基质。步骤(c)，加入一目标培养基质并培养48至72小时。步骤(d)，收集所述目标培养基质。步骤(e)，重复步骤(c)至步骤(d)1至5次。步骤(f)，过滤及浓缩所述目标培养基质，得到一间质干细胞培养物。

优选地，所述间质干细胞的来源为毛囊或皮肤。

优选地，所述预定数量为1×10⁷至5×10⁷个细胞。

优选地，所述第一培养基质包含胎牛血清及抗生素，所述第二培养基质不包含胎牛血清及抗生素。

优选地，所述平面培养装置的细胞贴附表面积为6000至6500平方厘米。

优选地，所述平面培养装置包括10个培养平台，每一个所述平台的表面积为600至650平方厘米。

优选地，所述目标数量为6×10⁷至1×10⁸个细胞。

优选地，在步骤(f)中，所述间质干细胞培养物是先通过一滤膜，再通过一切向流过滤系统所得到的；其中，所述滤膜的孔径为0.22微米。

优选地，在步骤(f)中进一步包含：利用一切向流过滤系统搭配截留分子量为3至5kD的一中空纤维膜，浓缩过滤所述目标培养基质中的所述间质干细胞培养物，并将所述间质干细胞培养物置换于一蛋白质保存液中。