[发明专利]包含突变型IL15以及嵌合抗原受体的融合蛋白

说明书

本发明涉及生物医学领域，具体而言，涉及一种包含突变型IL15以及嵌合抗原受体的融合蛋白。该融合蛋白包括依次串联的嵌合抗原受体、2A肽和突变型IL15。分泌的突变型IL15可使宿主细胞例如γδT细胞具有更强的扩增能力和更长的体内外持久性，因而具有比传统CAR疗法更好的抗肿瘤效果。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体而言，涉及一种包含突变型IL15以及嵌合抗原受体的融合蛋白。

背景技术

T细胞需要三种信号才能完全活化并维持功能：(i)肽/MHC复合物呈递的抗原(ii)有效的共刺激信号和(iii)可溶性细胞因子形式的生长和分化因子。第二代和第三代CAR可提供前两个信号，但没有主动供第三个依赖细胞因子的信号。为了将第三个信号也主动传递至表达CAR的T淋巴细胞，有研究将白介素(IL)-2受体β链的胞质结构域和STAT3结合酪氨酸-XX-谷氨酰胺(YXXQ)基序与CD3-ζ和CD28信号结构域相连。值得注意的是，第三种信号传导模块的加入使基因修饰的T细胞在体内具有更长的持久性，从而提供了更加有效的抗肿瘤作用。

细胞因子是一些比较小的蛋白质，其对免疫细胞的分化和功能具有重要的作用。因此，许多细胞因子(例如IL-2，IL-12，IL-18和IL-21)已在临床试验使用，主要用于癌症的治疗。但是，系统性施用会导致严重的副作用，例如系统性施用IL-12治疗多发性骨髓瘤。

为了克服上述问题同时充分利用细胞因子积极的作用，有研究采用表达CD19-CAR和IL12的载体转导T细胞，构建了能表达IL12的CAR-T细胞。这些CAR-T细胞有倾向性地归巢至肿瘤部位，在这里其分泌的IL12有助于有效的清除肿瘤。肿瘤免疫微环境中的Treg细胞会损伤T细胞的抗肿瘤反应，但研究表明CD19-IL12 CAR-T细胞能够抵抗Treg细胞的抑制作用。另外，伴随着巨噬细胞的激活，肿瘤部位T细胞的持久性也会相应地延长。然而，即使在这些情况下，IL12的分泌水平也需要严格的调控，因为大剂量的注射持续表达IL12的CAR-T后观察到相应的副作用。

除上述问题外，现有技术中也缺乏针对其他细胞因子与CAR技术联用的研究。

发明内容

本发明的第一方面涉及融合蛋白，包括依次串联的嵌合抗原受体、2A肽和突变型IL15；

所述突变型IL15的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明的第二方面涉及一种分离的核酸，其表达得到如上所述的融合蛋白。

本发明的第三方面涉及含有如上所述核酸的载体。

本发明的第四方面涉及分离的宿主细胞，其包含如上所述的融合蛋白，或包含如上所述的核酸，或被如上所述的载体所转化。

本发明的第五方面涉及药用组合物，其包含如上所述的宿主细胞。

本发明的第六方面涉及如上所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。

本发明提供了同时表达CAR和突变型IL15的融合蛋白及其在肿瘤治疗方面的应用。分泌的突变型IL15可使宿主细胞例如γδT细胞具有更强的扩增能力和更长的体内外持久性，因而具有比传统CAR疗法更好的抗肿瘤效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例中各组在Day10，Day12，Day16时CAR阳性率；各组细胞经FITC-Protein L染色，并用流式细胞术进行检测；