[发明专利]基于甲基化免疫沉淀高通量测序技术的肺癌检测方法

权利要求书

1.基于甲基化免疫沉淀高通量测序技术的肺癌检测方法，其特征在于，方法步骤如下：

步骤1：提取血浆游离DNA(cfDNA)；

步骤2：将cfDNA片段进行末端修复并补齐；

步骤3：将末端补齐的DNA与测序接头进行连接，得到连接产物；

步骤4：加入与DNA文库中游离DNA片段长度相似的未甲基化片段和具有不同程度甲基化片段，确保抗体与原始游离DNA比例恒定；

步骤5：加入标准的甲基化样本和非甲基化样本；

步骤6：热处理，使双链DNA解链，由于DNA甲基化发生在胞嘧啶5位碳原子上，通过加入5-羟甲基胞嘧啶抗体特异性结合甲基化的胞嘧啶，富集高甲基化的DNA片段；

步骤7：加入磁珠靶向捕获甲基化的DNA片段；

步骤8：使用甲基化纯化磁珠，多次洗涤去除未结合DNA片段；

步骤9：对这些通过免疫沉淀获得的甲基化片段进行PCR扩增，制备测序文库；在制备测序文库过程中包含多个纯化步骤，选择使用磁珠法进行纯化；

步骤10：对测序文库进行质量检查；

步骤11：将含有不同barcode的文库按相同摩尔浓度混匀，根据二代测序仪器使用标准方法进行上机测序，获得测序结果；

步骤12：5mC生物标志物的选择和模型构建；

步骤13：数据分析。

2.根据权利要求1所述的基于甲基化免疫沉淀高通量测序技术的肺癌检测方法，其特征在于，在步骤2中，首先将提取的cfDNA进行片段长度检测；再将筛选的cfDNA进行末端修复并补齐。