[发明专利]同时扩增γδT和NK的培养方法

说明书

本发明涉及免疫医学领域，具体而言，涉及一种细胞培养方法，其包括：将高表达mIL15和CD137L、且经过失活处理的人工抗原递呈细胞与PBMC在培养基中共培养；所述培养基包括基础培养基以及附加组分，所述附加组分包括100IU/mL～1200IU/mL的IL2以及3μM～7μM的唑来膦酸。该方法培养得到的细胞NK细胞和γδT细胞比例较高，具有更优异的抗肿瘤作用。

技术领域

本发明涉及免疫医学领域，具体而言，涉及一种同时扩增γδT和NK的培养方法。

背景技术

目前CAR T细胞在治疗肿瘤方面取得重大的进展，尤其是CD19 CAR T细胞在治疗B细胞恶性血液瘤上取得令人鼓舞的成绩。目前的大多数CAR T临床试验是使用病人自身的T细胞进行改造，因此T细胞的质量和数量的下降以及制备自体CAR T细胞产品的时间和费用提高都成为阻碍CAR T细胞治疗发展的重要因素。所以，发明通用型CAR T细胞产品不仅能提高CAR T细胞的质量和数量，还能节省生产的时间和费用。另外，传统的CAR T是使用αβT细胞进行改造，αβT细胞是依赖HLA识别肿瘤相关抗原，如果使用αβT细胞作为通用型CAR T细胞产品的细胞类型，很可能导致移植物抗宿主病(graft versus host disease，GVHD)。因此，通用型CAR T细胞的细胞类型选择尤为重要。

γδT在循环T细胞中占1％-5％，虽然所占的比例比较低，但对来自39个恶性肿瘤的约18.000个人类肿瘤表达特征的荟萃分析表明，肿瘤内γδT细胞的表达是对生存率最有利的预后指标之一。这使得γδT细胞是用于CAR治疗的一个非常有吸引力的细胞类型。而事实上，各种研究已经表明，γδCAR T细胞是完全能够裂解特异性肿瘤靶细胞。

NK细胞是细胞免疫系统的另一个重要组成部分，具有杀死肿瘤细胞和被病毒感染的细胞的强大能力。在多个体内肿瘤模型中证实了，表达CAR的NK细胞在识别靶细胞后会产生大量细胞因子，从而导致肿瘤细胞裂解。尽管NK细胞表现出强的细胞毒性，但是它们的寿命短限制了它们的应用。这一缺点可以分别使用IL-12，IL-15和IL-18来克服，这些细胞因子都可以使NK细胞分化为记忆细胞，从而改善NK细胞在体内的持久性。目前两项临床研究(NCT0095137，NCT01974479)正在评估CD19-CAR转导的NK细胞作用。

NK细胞和γδT细胞并不依赖单一抗原识别和杀伤肿瘤细胞，其次，NK细胞和γδT细胞识别靶细胞并不依赖MHC方式，这会减少同种异体反应和GVHD。大多数研究仅集中于一种细胞类型进行治疗，但用不同细胞类型的联合治疗可能会有更好的治疗效果。目前已经有研究开发用于扩增T淋巴细胞，γδT细胞和NKT细胞的方案。使用唑来膦酸，干扰素-γ(IFN-γ)，白介素2(IL-2)，CD3抗体和工程化的K562作为饲养细胞来刺激PBMC能有效地扩增γδT细胞，其比例达到20％以上。与使用传统CAR-T细胞治疗相比，这种使用不同细胞组合的治疗效果更加优异，肿瘤细胞裂解率也更高。但这个方案同时也包含大量αβT，并不能用于异体回输。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细胞培养方法，其包括将高表达mIL15和CD137L、且经过失活处理的人工抗原递呈细胞与PBMC在培养基中共培养；

所述培养基包括基础培养基以及附加组分，所述附加组分包括100IU/mL～1200IU/mL的IL2以及3μM～7μM的唑来膦酸。

PBMC同时扩增NK细胞和γδT细胞的培养基和方法，可获得NK细胞和γδT细胞的混合细胞制剂，经过工程化改造可用于自体或异体的肿瘤治疗。首先，使用PBMC来制备能保证细胞的质量和数量；其次，与传统CAR-T细胞制备相比能大大节省制备的时间和费用。再次，使用NK细胞和γδT细胞能减少GVHD的发生。最后，与单独使用NK细胞或单独使用γδT细胞相比，NK细胞和γδT细胞的混合细胞具有更优异的抗肿瘤作用。

附图说明