[发明专利]去除同种或异种生物材料的免疫原性的方法

说明书

本发明涉及医药材料领域，特别涉及去除同种或异种生物材料的免疫原性的方法。本发明采用洗涤剂和酶结合的方法，充分利用新型洗涤剂的破膜和溶解蛋白的优势，同时利用核酶的特异性分解作用，有效去除细胞成分和细胞外基质抗原物质。达到时间短，去除免疫原性效果好的优势。

技术领域

本发明涉及医药材料领域，特别涉及去除同种或异种生物材料的免疫原性的方法。

背景技术

心脏瓣膜疾病是一种具有高发病率及高致死率的疾病，全世界范围内心脏瓣膜疾病率随着老年化的日益加重，正逐年攀升，已成为世界范围内危及生命的主要医疗保健问题之一。晚期瓣膜性疾病导致丧失自我修复功能，瓣膜置换术成为唯一的手术选择。全世界每年进行近30万例瓣膜置换手术，预计到2050年这个数字将增加两倍。目前人造心脏瓣膜主要由机械心脏瓣膜和生物假体心脏瓣膜两大类型组成，并已广泛应用了几十年。两种人造瓣膜各有优缺点；机械瓣膜耐久高，可以达到二十年以上，但是其容易形成血栓，需要终生抗凝。而生物心脏瓣膜由于其较机械瓣膜有更低的血栓形成性，从而避免了终生抗凝的需要，并且能表现出与天然瓣膜相似的优良的血流动力学特性而越来越多地被临床采用，但是生物心脏的耐久性较差，使用寿命只有10-15年，导致患者需承受再次开胸手术的痛苦。

生物心脏瓣膜耐久性较差的原因与生物瓣膜的免疫原性相关。由于生物瓣膜材料属于异种组织材料，不可避免的会有免疫原性，从而发生排斥反应。为了掩盖组织抗原性，异种组织瓣膜在植入前都要经过戊二醛固定。然而戊二醛存在众所周知的缺点，残存的戊二醛显示出阻止宿主细胞附着、迁移和增殖的细胞毒性作用从而增加钙化和组织疲劳的风险；此外戊二醛交联过后的生物瓣膜材料无法在体内生长和重塑，限制了其进一步的临床应用。如年轻人或者小孩随着生长，需要多次置换瓣膜，导致生活质量的严重下降。最近的研究表明，戊二醛固定后的抗原性掩盖是不完全的，会导致慢性移植物特异性免疫反应，从而限制了瓣膜的寿命。

来自异种组织的细胞往往被机体视为外来物，从而发生免疫排斥反应攻击外来细胞，导致细胞的失活和死亡，从而导致组织瓣膜的钙化和衰败。为了防止生物瓣膜的钙化和衰败，脱细胞化已被提出作为一种降低组织抗原性的方法，从而获得更好的组织相容性、重塑和长期持久性。

目前生物瓣膜的细胞去除方案，主要包括物理方法(如通过低渗和高渗反复交替、反复冻融、冷冻干燥、超高压等)、化学方法(高浓度的离子、非离子、两性离子洗涤剂(Triton X-100(曲那通X-100)，十二烷基硫酸钠(SDS)、3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸盐(CHAPs)等)和酶的方法(胰蛋白酶和核酸酶(DNAse和RNAse)等)脱去细胞。

目前国内外运用得最广的是洗涤剂加上酶法进行脱细胞，其中两性离子洗涤剂(Triton X-100(曲那通X-100)，十二烷基硫酸钠(SDS)运用最广。

虽然国内外有多种免疫原性去除的方法，但仍存在一些问题：(1)相应的化学试剂可引起细胞外基质三维结构的破坏，对脱细胞组织的力学性能有负面影响；(2)目前的处理方法无法满足生物瓣膜免疫原性去除的要求，残留的碱基以及细胞外基质抗原依然会引起免疫反应；(3)其相应的处理时间持续较长，特别是单一或者仅两者方法结合的，其处理过程均在一周以上。

因此，如何快速高效的去除异种生物瓣膜的细胞成分及免疫原性，维持异种生物瓣膜完整的细胞外基质结构，并保证其良好的生物力学性能，具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明采用新型两性离子去污剂烷基聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)进行生物瓣膜的免疫原性去除处理。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供的去除同种或异种生物材料的免疫原性的方法，包括如下步骤：

步骤1：取同种或异种生物材料经第一漂洗后，与杀菌剂混合，获得杀菌后的生物材料；